Поделиться:
Негативное окрашивание основы, методика, достоинства и недостатки
негативное окрашивание Это специальный метод окрашивания, чтобы подчеркнуть присутствие капсулы в некоторых микроорганизмах - в основном Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae и Cryptococcus neoformans-, из клинических образцов или чистых культур.
Прямой образец, обычно используемый для нанесения негативного окрашивания, представляет собой спинномозговую жидкость. Этот метод представляет собой быструю альтернативу для предположительной диагностики менингита, особенно Cryptococcus neoformans.
Аналогично, это пятно можно наносить на мокроту и стерильные жидкости в целом, а также на штаммы, полученные из молодых чистых культур. Этот метод использует нигрозин или китайские чернила для его выполнения; следовательно, это очень простая и экономичная методология, позволяющая в короткие сроки получить информацию, имеющую большую диагностическую ценность..
В этом смысле любая лаборатория способна выполнить такую окраску. Конечно, лаборатория должна иметь компетентный персонал, способный распознавать дрожжи Cryptococcus neoformans изолировать или почковать и дифференцировать их от лейкоцитов и артефактов, которые может представлять образец.
индекс
- 1 фундамент
- 2 Техника
- 2.1 Материалы
- 2.2 Спецификации для отбора проб
- 2.3 Выполнение методики с прямыми образцами
- 2.4 Выполнение методики со штаммами из культуры
- 2.5 Наблюдение в микроскоп
- 3 преимущества
- 4 Недостаток
- 5 Окрашивание тканей индийскими чернилами
- 6 Ссылки
фундамент
Нигрозин и индийские чернила действуют аналогичным образом; следовательно, любое из двух веществ может использоваться взаимозаменяемо.
Эту технику называют негативным окрашиванием, потому что она действует вопреки остальным методам окраски. В этом то, что остается неокрашенным, это структура, которую ищут или которую вы хотите увидеть; то есть микроорганизмы.
Поэтому окраска основана на окрашивании дна мазка в темный цвет. В этом сценарии закрытые структуры будут выделены светлым или бесцветным цветом..
В целом, у дрожжей наблюдаются преломляющие, окруженные прозрачным ореолом, соответствующим капсуле. Это происходит потому, что китайские чернила и нигрозин являются веществами, которые не могут проникнуть в полисахарид, который образует капсулу живых микроорганизмов..
Стоит отметить, что другие структуры, которые могут присутствовать в прямом образце, такие как лейкоциты или эритроциты, не проникают.
Теперь, если микроорганизмы мертвы, настойка может проникнуть внутрь них таким образом, что это окрашивание также полезно для оценки жизнеспособности микроорганизмов..
техника
материалы
нигрозин
Нигрозин обязан своим названием чёрному цвету. Это синтетическое вещество, которое получают нагреванием смеси органических соединений, таких как нитробензин, анилин и гидрохлорид анилина, с использованием катализатора (железо или медь) в указанной реакции..
Китайские чернила
Китайские чернила - это вещество, используемое в основном азиатами для письма, создания произведений искусства и монохромной живописи. Это очень популярно в китайской культуре.
Его получают из чернил кальмара, смешанных с пылевидным углем, продуктом горения маленьких смолистых деревьев..
Также возможно приготовить его из сажи при сжигании углеводородов (растительных масел) вместе с белковым желатином, который придает ему правильную консистенцию для предотвращения осаждения углеродных частиц..
Спецификации для отбора проб
- Не требует поста.
- Образец CSF, мокроты или стерильной жидкости должен содержать не менее 1 мл объема и должен быть немедленно переведен в лабораторию при комнатной температуре..
- CSF и стерильные жидкие образцы должны быть взяты специализированным доктором.
- Это также может быть чистая культура подозрительного штамма, связанного с вышеупомянутыми патогенами..
Исполнение методики с прямыми образцами
- Образцы должны быть центрифугированы, затем супернатант выбрасывается и осадок отбирается.
- Капля центрифугируемого материала (осадок) и капля китайских чернил или нигрозина помещаются на чистое предметное стекло..
- Это должно быть хорошо смешано и покрыто покровным стеклом, позволяя падению распространяться как тонкая пленка, не превышая края.
- Впоследствии препарат монтируется в микроскоп.
- Если препарат слишком темный, его можно разбавить водой.
Исполнение методики со штаммами из культуры
- Очень маленькая порция молодого урожая берется с помощью высевающей иглы и растворяется в капле китайских чернил, предварительно помещенных на чистое предметное стекло..
- Покровное стекло помещается сверху.
- Это наблюдается в микроскопе в 10 раз, а затем в 40 раз.
Вы также можете растворить часть колонии в дистиллированной воде, а оттуда взять каплю и смешать ее с чернилами. Таким образом, препарат не будет таким густым, что позволит наблюдать за структурами в отдельности; Если есть агломерации, это не будет хорошо наблюдаться.
Другая методология заключается в следующем:
- Поместите каплю культуры в суспензию на одном конце слайда.
- Поместите каплю нигрозина на тот же конец и перемешайте.
- С помощью другого слайда вытяните образец, как если бы вы делали гематологический мазок.
- Дайте высохнуть и понаблюдайте под микроскопом.
Наблюдение в микроскоп
Во-первых, вы должны сосредоточиться на 10-кратной задаче, чтобы иметь широкий обзор поля. Впоследствии вы должны искать, если есть свободные места; если есть, сфокусируйтесь на 40X, чтобы увидеть детали.
выгода
- Это легко выполнить.
- Это экономическая техника.
- Этот метод не требует, чтобы мазок фиксировался для нагрева или химикатов; следовательно, микроорганизмы наблюдаются без искажений.
- Свежий препарат не нужно сушить, поэтому его можно наблюдать немедленно, быстро получая результаты..
неудобство
После сборки свежие препараты следует наблюдать немедленно; Если им позволено высохнуть, то уже невозможно наблюдать их и новый.
Окрашивание тканей индийскими чернилами
Другая функция, которую могут выполнять китайские чернила, - в лабораториях патологии. Это применяется к образцам ткани, удаленным хирургическим путем, чтобы отметить края резекции опухоли.
Маркированная ткань опрыскивается уксусной кислотой. Это действует как протрава и предотвращает отслоение чернил, когда ткань подвергается обычной обработке для подготовки биопсии.
Процедура заключается в купании ткани в спирте и ксилоле, а затем впитывании парафином. Эта маркировка направляет патолога при наблюдении за тканью, указывая, где находится край хирургической резекции или другой интересный объект..
ссылки
- «Нигрозин». Википедия, Свободная энциклопедия. 11 июля 2017, 22:46 UTC. 6 января 2019, 16:56: en.wikipedia.org
- "Китайские чернила". Википедия, Свободная энциклопедия. 1 октября 2018, 03:08 UTC. 6 января 2019 года, 18:20: en.wikipedia.org/
- Сильва Л, Сильва С, Фернандес Н, Буэно С, Торрес Дж, Рико М, Макиас Ж и соавторы. (2006). Трудовой персонал автономного сообщества Эстремадура. Конкретная повестка дня Том IV. Редакция MAD. Севилья-Испания, стр. 211-212.
- Сильва М., Гарсия М., Корралес Дж., Понсе Е. (2006 г.), специалист-лаборант Галицкой службы здравоохранения (СЕРГАС). Тематика конкретного тома 2. Редакция MAD. Севилья-Испания, стр. 79-80.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Bailey & Scott. 12 изд. Аргентина. Panamericana S.A Редакция