Окраска маей Грюнвальд-Гимза, техника и применение



Май Грюнвальд-Гимза пятно o Паппенхайм - это метод дифференциальной окраски, в котором смешиваются реагенты Гимза и Май Грюнвальд. Он используется для дифференцировки нормальных и аномальных клеток крови в мазках периферической крови и костного мозга, а также для окрашивания гистологических срезов и цитологических образцов.

Оба реагента - Gemsa и May Grünwald - получены путем окрашивания по Романовскому, методики, основанной на сочетании кислотных и основных красителей..

Гимза усовершенствовал технику, стабилизировав смесь эозина, метиленового синего и его производных с глицерином. Напротив, Мэй Грюнвальд использует эозин и метиленовый синий, используя метанол в качестве растворителя. Эта стратегическая комбинация дала отличные результаты.

Хотя с точки зрения наблюдения клеточная морфология действует аналогично окраскам Гимзы и Райта, этот метод улучшает предыдущие за счет тонкой настройки окраски паразитов, вызывающих малярию, болезнь Шагаса, лейшманиоз и трихомониаз..

Кроме того, это оказалось очень полезным методом для цитологического исследования сперматозоидов. Это было подчеркнуто не только показом морфологических характеристик сперматозоидов, но и позволяет с большой эффективностью дифференцировать лейкоциты, эпителиальные клетки и клетки сперматогенеза.

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Разнообразие красителей
  • 2 Техника
    • 2.1 Материалы
    • 2.2 Концентрированный раствор красителя Май Грюнвальд
    • 2.3 Концентрированный краситель Гимза
    • 2.4 Приготовление буферного раствора при рН 7,2
    • 2.5 Процедура окрашивания мазка крови или костного мозга
    • 2.6 Расширенная техника окрашивания сперматозоидов
    • 2.7 Важные характеристики
  • 3 использования
    • 3.1 Вагинальная цитология
    • 3.2 Образец спермы
  • 4 Ссылки

фундамент

Этот метод основан на пятнах Романовского, в которых кислотные красители обладают селективным сродством к основным клеточным компонентам, а кислотные компоненты притягивают основные красители..

По-другому объяснено, что клеточные структуры и красители имеют положительные или отрицательные электрические заряды; равные заряды отталкиваются и привлекаются разные заряды.

Например, основные красители, такие как метиленовый синий, заряжены положительно и притягиваются отрицательно заряженными структурами. Вот почему этот краситель окрашивает ядра, которые богаты ДНК и РНК, которые имеют отрицательно заряженные фосфатные группы.

Гранулы сегментированных базофилов и цитоплазм мононуклеарных лейкоцитов, содержащих РНК, также окрашивают.

Аналогично, кислотный краситель несет отрицательный заряд, поэтому он соединяет положительно заряженные структуры, такие как эритроциты и гранулы сегментированных эозинофилов. Что касается гранул сегментированных нейтрофилов, они фиксируют оба красителя.

Разнообразие красителей

В этой технике сосуществуют сочетания реакций между ортохроматическими красителями и метахроматикой. Ортохроматика (эозин и метиленовый синий) связываются с клеточной структурой, с которой они связаны, и обеспечивают стабильный цвет, который не изменяется.

С другой стороны, метахроматика (производные лазурной метиленовой сини A и лазурной B) изменяют свой первоначальный цвет, как только они связаны с конкретной структурой, и могут даже быть различные оттенки.

Наконец, шаг, осуществляемый решением Майя Грюнвальда, требует присутствия воды, потому что без него краситель проникает в структуры, но не фиксируется. Чтобы это произошло, краситель должен стать полярным или ионизированным и, таким образом, иметь возможность осаждаться и прикрепляться к связанным структурам..

техника

материалы

- Слайды для слайдов.

- Окраска мостов.

- Раствор Май-Грюнвальд.

- Гимза пятно.

- Дистиллированная вода.

Концентрированный раствор красителя Май Грюнвальд

Нужно взвесить 0,25 г эозин-метиленового синего (краситель по Мэй Грюнвальд) и растворить в 100 мл метанола. Затем смесь перемешивают в течение 1 часа и оставляют на 24 часа. Закончили время, это фильтры.

Чтобы применить методику, краситель Май Грюнвальда должен быть разбавлен следующим образом: для 200 мл разбавленного красителя измеряется 30 мл концентрированного раствора, добавляется 20 мл буферного раствора и 150 мл дистиллированной воды, доведенной до pH 7,2-7,3. , Затем он смешивается и фильтруется.

Концентрированный краситель Гимза

Взвесить 0,5 г азур-эозин-метиленового синего (краситель по Гимзе), растворить в 50 мл метанола и поместить в смесь 50 мл глицерина..

Чтобы выполнить технику, разбавьте 1:10 буферным раствором и оставьте на 10 минут. Это может быть отфильтровано при необходимости.

Приготовление буферного раствора при рН 7,2

Они должны быть взвешены:

- 40 мг дигидрофосфата калия (KH2PO4).

- 151 мг ди-натрия гидрофосфат 12-гидрата (Na2HPO4).

Оба соединения растворяются в 100 мл воды.

Процедура окрашивания мазка крови или костного мозга

Есть два способа: классический и быстрый.

Классический режим

  1. Покройте мазки на 2 или 3 минуты разбавленным раствором Мей-Грюнвальда..
  2. Вымойте с буферизованной дистиллированной водой, чтобы устранить предыдущее решение.
  3. Накрыть тем же буферным моющим раствором и оставить на 1 минуту. Идея состоит в том, что предыдущий краситель фиксируется на структурах и что в то же время клетки гидратируются.
  4. Добавить 12 капель разбавленной настойки Гимзы на забуференную воду и взорвать, чтобы смешать и гомогенизировать. Дайте постоять 15 или 20 минут.
  5. Промойте мазки буферизованной дистиллированной водой и высушите на воздухе.
  6. Сфокусируйте и наблюдайте в оптическом микроскопе клетки крови, окрашенные с использованием объектива 40Х. При необходимости можно использовать 100X.

Быстрый режим

  1. Покройте мазок краской May Grünwald, разведенной в течение 1 минуты..
  2. Промыть буферной дистиллированной водой.
  3. Залейте буферной водой и оставьте на 1 минуту.
  4. Поместите разбавленный краситель Гимза и оставьте на 5 минут..
  5. Промыть буферной дистиллированной водой и дать высохнуть на воздухе.

Методы, описанные здесь, являются ориентиром, но необходимо учитывать, что процедуры и время окраски варьируются в зависимости от коммерческого предприятия, поставляющего реагенты. Желательно следовать шагам, строго указанным каждым коммерческим домом.

Техника окрашивания сперматозоидов

1- Покройте спред тонким слоем раствора Грюнвальда в течение 4 минут..

2- Удалить краситель и промыть дистиллированной водой.

3- Поместите слой разбавленной Гимзы (1:10) в дистиллированную воду на 15 минут..

4- Удалить краситель и промыть дистиллированной водой.

5- Дайте высохнуть и наблюдать под микроскопом.

Важные характеристики

Метод требует, чтобы рН реагентов и моющих растворов был доведен до 7,2-7,3, чтобы сродства красителей к клеточным структурам не искажались и не изменяли ожидаемый конечный цвет..

приложений

Эта методика используется клиническими лабораториями для окрашивания мазков периферической крови и костного мозга, срезов тканей и цитологий..

В гематологической области этот метод имеет жизненно важное значение при изучении аномалий клеток с точки зрения формы, размера и количества. Это очень ценный инструмент для диагностики некоторых заболеваний, таких как лейкемия и анемия.

Кроме того, он представляет выдающуюся полезность при поиске паразитов в гематологических полях (Plasmodium sp и Трипаносома Крузи) или гистологический (Leishmanias sp).

Вагинальная цитология

Что касается влагалищной цитологии, этот метод особенно выгоден для наблюдения Trichomonas vaginalis. Это важный вывод, так как его наличие имитирует картины карциномы на месте которые затем исчезают при уничтожении паразита.

Образец спермы

Это был идеальный инструмент для исследования образцов спермы, поскольку он предоставляет ценную информацию о качестве спермы.

Данные, которые он предлагает, имеют отношение главным образом к числу и морфологии, а также к сопутствующим клеткам, которые могут присутствовать и имеют жизненно важное значение, таким как половые клетки, лейкоциты и эпителиальные клетки..

С помощью этого анализа можно описать аномалии, наблюдаемые в сперме в голове, шее, средней части и основной части.

Кроме того, они также могут помочь выявить случаи гемоспермии (наличие эритроцитов в сперме) и лейкоспермии или пиоспермии (увеличение количества лейкоцитов в сперме).

ссылки

  1. Костаманья С., Прадо М. Валидация свежего теста, май Грюнвальд-Гимза и грамм цветов и питательных сред для диагностики Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Доступно в: scielo.
  2. Лаборатория Merck KGaA. Май Грюнвальд Эозин метиленовый синий для микроскопии.
  3. «Пятно Мая-Грюнвальда-Гимзы». Википедия, Свободная энциклопедия. 15 ноября 2018 года, 14:37 UTC. 8 января 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Лаборатория стекольной химии Panreac. Реагенты для гистологических методик, гематологии и микробиологии. Доступно по адресу: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Рекомендации по окрашиванию мазков крови для считывания показателей крови. Национальная и справочная биомедицинская лаборатория. Институт общественного здравоохранения Чили.
  6. Sarabia L. Спермиограмма в соответствии с критериями ВОЗ. Программа анатомии и биологии развития. Медицинский факультет Университет Чили Доступно по адресу: pp.centramerica.com