Основа, приготовление и применение тетратионатного бульона

тетратированный бульон или TT бульон представляет собой селективную жидкую культуральную среду для обогащения и восстановления штаммов сальмонелл. Он был создан Мюллером, а затем модифицирован Кауфманом, поэтому есть те, кто называет его бульоном Мюллера-Кауфмана.

Исходная среда содержала протеозо-пептоны, карбонат кальция и тиосульфат натрия. Кауфманн добавил соли желчи и создал еще одну модальность с ярко-зеленым. Эти вещества подавляют рост колиформ, оставляя свободную среду для развития патогенных бактерий, в данном случае сальмонеллы.

Модификация была очень успешной, потому что она значительно увеличила чувствительность среды. Поэтому в настоящее время он полезен для поиска сальмонелл в образце любого типа, но особенно для твердых или жидких фекалий и продуктов питания..

Его подготовка состоит из двух этапов; коммерческая среда является основой для приготовления тетратионатного бульона, а затем для образования тетратионата добавляют йодированный раствор йода для завершения среды.

Американская ассоциация общественного здравоохранения (APHA) рекомендует использовать бульон тетионат с ярко-зеленым бульоном для обогащения образцов при поиске сальмонелл, поскольку он более селективен, чем бульон тетратионат и селенитовый бульон..

В общем, тетратионатный бульон идеален, когда подозревают бактерии рода Salmonella в небольших количествах или злоупотребляют воздействием ингибирующих веществ или промышленными процессами, которые сводят к минимуму их жизнеспособность..

индекс

• 1 фундамент
• 2 Подготовка
  • 2.1 - тетратионат
  • 2.2-Вариантный тетратионатный бульон с ярко-зеленым
• 3 Использование
• 4 Контроль качества
• 5 рекомендаций
• 6 Ссылки

фундамент

Настоящие пептоны соответствуют расщеплению казеина поджелудочной железой и пептическому перевариванию тканей животных. Они обеспечивают источник углерода, азота и питательных веществ в целом для роста бактерий..

В свою очередь тиосульфат натрия реагирует с йодированным раствором с образованием тетратионата. Это подавляет рост колиформ и способствует развитию бактерий, которые содержат фермент тетратионатредуктазу, в том числе род Salmonella, а также Proteus..

Соли желчи также действуют как ингибирующее вещество для большинства грамположительных бактерий и некоторых грамотрицательных бактерий (колиформ)..

Карбонат кальция поглощает токсичные вещества, образующиеся при разложении тетратионата, который образует серную кислоту. В этом смысле карбонат кальция нейтрализует кислотность, поддерживая рН стабильной среды..

В случае ярко-зеленой модальности это вещество увеличивает селективную силу тетратионатного бульона, подавляя другие микроорганизмы, кроме рода Salmonella..

подготовка

-Тетратированный бульон

Йод йод раствор

Сожаление:

• 6 гр йода.
• 5 г йодистого калия.

Йодид калия растворяют в приблизительно 5 мл стерильной дистиллированной воды, затем йод добавляют понемногу, пока смесь нагревается. После полного растворения его наполняют стерильной дистиллированной водой до конечного объема 20 мл..

Половина основания для тетратионатного бульона

Взвесьте 46 граммов обезвоженной среды и суспендируйте в 1 литре стерильной дистиллированной воды. Смешайте и нагрейте до полного растворения, его можно кипятить всего несколько минут. Не стерилизовать в автоклаве. Основание среды оставляют охлаждаться до примерно 45 ° С и в это время добавляют 20 мл йодированного раствора..

После добавления раствора иодурада в среду следует использовать сразу. Если вы не хотите использовать всю смесь, действуйте следующим образом:

10 мл базовой среды распределяется по пробиркам, и только 0,2 мл йодированного раствора добавляется к тем, которые должны быть инокулированы образцами..

Те, которые не будут использоваться, могут храниться в холодильнике, однако, поскольку среда не стерилизована, идеальным является приготовление точного необходимого количества..

Цвет среды перед добавлением йодированного раствора йода молочно-белый с белым осадком, а после добавления коричневый с плотным осадком. Наблюдаемый осадок является нормальным и соответствует карбонату кальция, который не растворяется. Конечный pH среды составляет 8,4 ± 0,2..

-Тетратионатный бульон вариант с ярко-зеленым

Чтобы приготовить тетратионатный бульон с ярко-зеленым бульоном, все описанные выше стадии выполняются, но дополнительно к смеси будет добавлено 10 мл ярко-зеленого раствора, приготовленного в концентрации 0,1%..

Ярко-зеленый

Это решение готовится следующим образом:

Взвесить 0,1 г ярко-зеленого цвета и суспендировать в 100 мл дистиллированной воды. Нагреть до кипения, чтобы достичь полного растворения. Сохранить в янтарной бутылке.

использование

Для образцов кала (культура кала) протокол выглядит следующим образом:

Инокулировать 1 г твердого стула или 1 мл жидкого стула в пробирку с 10 мл готового к употреблению тетратионатного бульона. Энергично встряхните и инкубируйте при аэробиозе при 43 ° С в течение 6-24 часов..

Затем берут аликвоту от 10 до 20 мкл бульона и пересеивают его в среде, селективной к сальмонелле, такой как агар SS, агар XLD, ярко-зеленый агар, кишечный агар Hektoen и другие..

Параллельно селективные среды для сальмонелл должны быть инокулированы прямым образцом (калом) без обогащения. Для образцов ректальных мазков загрузите материал, собранный в пробирку, и действуйте, как описано выше..

Для образцов пищи взвешивают 10 г твердой пищи или 10 мл жидкой пищи и инокулируют во флакон со 100 мл готового к употреблению тетратионатного бульона. Действуйте так же, как описано выше, но инкубируйте при 37 ° C.

Как видно, соотношение между пробой и бульоном всегда будет 1:10.

Контроль качества

Для тестирования культуральной среды можно использовать известные контрольные штаммы. Наиболее часто используемые штаммы сертифицированы ATCC..

Используемые штаммы Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Кишечная палочка ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 и Золотистый стафилококк ATCC 25923.

Для штаммов сальмонеллы ожидается отличное развитие, в то время как Кишечная палочка может иметь слабое или регулярное развитие, а грамположительные штаммы (Enterococcus и Staphylococcus) частично или полностью ингибируются.

рекомендации

-Поскольку эта среда не ингибирует рост протеуса, некоторые лаборатории используют 40 мг / л новобиоцина для предотвращения развития этого микробного штамма. Антибиотик должен быть добавлен до йодированного раствора йода.

-После приготовления среды, включающей йодированный раствор йода, она не должна быть более 2 часов после инокуляции.

-В момент распределения среды в пробирках смесь должна непрерывно гомогенизироваться для ресуспендирования образовавшегося осадка..

-В менее загрязненных образцах тетратионатный бульон инкубируют при 35-37 ° С, а в сильно загрязненных образцах рекомендуется инкубация при 43 ° С..

ссылки

1. Лаборатория Конда Пронадиса. 2010. Основание тетратионатного бульона по Мюллеру-Кауфману. Доступно в:
2. BD Laboratories 2003. Основа тетратионатного бульона. Доступно в:
3. Лаборатории Британии. 2015. Тетионатная бульонная основа. Доступно в:
4. Медиа BBL. 2005. Трубные препараты для выращивания видов сальмонелл.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение питательных сред селенита натрия и тетратионата натрия, оба инкубируют при 37 ° C и 42 ° C для изоляция Salmonella spp табуретки. Преподобный Биомед 2003; 14 (4): 215-220