Основа, приготовление и использование бульона ЕС



ЕС бульон или бульон Кишечная палочка Это селективная жидкая культуральная среда. Эта среда рекомендована Стандартными методами подсчета общей и фекальной кишечной палочки, методом наиболее вероятного количества (NMP) в пробах воды и пищи, где основным агентом является Кишечная палочка.

ЕС бульон состоит из триптина, лактозы, желчных солей, дикалийфосфата, монокалийфосфата, хлорида натрия и воды. Его формула стратегически разработана, чтобы способствовать росту общей и фекальной кишечной палочки и предотвратить развитие других сопутствующих микроорганизмов.

Бактерия Кишечная палочка является основной фекальной кишечной палочкой, присутствующей в качестве загрязнителя в воде и пищевых источниках, вызывая важные желудочно-кишечные поражения.

Следует отметить, что существует много серотипов Кишечная палочка; среди них можно отметить энтерогеморрагический (EHEC), энтероинвазивный (EIEC), энтеропатогенный (EPEC), энтеротоксигенный (ETEC) и энтероагрегационный (EAEC).

Это средство обладает способностью разрешать развитие всех из них, но не может различать их. Для этого необходимо провести дополнительные тесты.

Микробиологическое исследование воды и пищи по наиболее вероятному количеству (NMP) для поиска общей и фекальной кишечной палочки является протоколом, который соответствует нескольким этапам; предполагаемая фаза, подтверждающая фаза и фаза завершения. ЕС бульон используется в подтверждающей фазе.

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 ЕС бульон
    • 1.2 ЕС бульон, модифицированный новобиоцином
  • 2 Подготовка
    • 2.1 ЕС бульон
    • 2.2 ЕС бульон, модифицированный новобиоцином
  • 3 Использование
    • 3.1 Анализ общей и фекальной кишечной палочки
  • 4 Контроль качества
  • 5 рекомендаций
  • 6 Ссылки

фундамент

ЕС бульон

Среда ЕС основана на предоставлении необходимых питательных элементов для оптимального развития общей и фекальной кишечной палочки, в которую входит бактерия. Кишечная палочка.

Эти питательные элементы обеспечиваются триптином, являющимся отличным источником пептидов и аминокислот. Кроме того, он также содержит лактозу, ферментируемый углевод, который обеспечивает энергию и позволяет показать, выделяет ли бактерия газ.

С другой стороны, среда содержит соли желчных кислот, которые обеспечивают селективный характер, поскольку она ингибирует рост грамположительных микроорганизмов, которые могут присутствовать в образце..

Аналогично, дикалийфосфат и монокалийфосфат действуют как система балансировки pH. Эта система необходима, потому что лактоза, содержащаяся в бульоне, имеет тенденцию подкислять среду, когда она сбраживается микроорганизмами, но это компенсируется фосфатными солями..

Следовательно, эти элементы необходимы, поскольку неконтролируемая кислотность может влиять на правильное развитие искомых микроорганизмов..

Со своей стороны, хлорид натрия осмотически стабилизирует среду, в то время как вода является растворителем присутствующих растворенных веществ и обеспечивает жидкую консистенцию среды.

ЕС бульон, модифицированный новобиоцином

Окренд и Роуз создали разнообразный бульон ЭК, названный бульоном ЕС, модифицированным новобиоцином. Модификация заключалась в снижении концентрации желчных солей и добавлении 20 мг / дл новобиоцина.

Эта модификация способствует восстановлению штаммов Кишечная палочка энтерогеморрагический (O157: H7).

Этот бактериальный серотип вызывает тяжелый геморрагический колит, который может вызвать гемолитический уремический синдром (ГУС); что в свою очередь может привести к острой почечной недостаточности с высоким уровнем смертности, который может достигать до 50% у пожилых людей.

Из-за заболеваемости и смертности, вызываемой ежегодно этой бактерией из-за употребления загрязненной пищи, Министерство сельского хозяйства США (USDA) широко рекомендует использовать это средство..

подготовка

ЕС бульон

Взвесьте 37,4 г обезвоженной среды и растворите в 1 л дистиллированной воды. Смесь должна быть оставлена ​​на 5 минут. Впоследствии, в источнике тепла, растворяется растворяется часто.

После растворения его распределяют в пробирки, предварительно кондиционированные внутри пробиркой Дарема. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут.

PH среды должен составлять 6,9 ± 0,2. Цвет обезвоженной среды - бежевый, а приготовленный - светло-янтарный..

Вина хранятся в холодильнике до использования. Во время использования бульоны должны быть комнатной температуры.

С другой стороны, бульон ЕС также может быть приготовлен в двойной концентрации.

ЕС бульон, модифицированный новобиоцином

Взвесьте 36,7 г обезвоженной среды и растворите в 1 л воды. Остальная часть препарата такая же, как описанная выше.

использование

Анализ общей и фекальной кишечной палочки

Бульон ЭК идеален для подтверждающей фазы изучения колиформ методом NMP, как в пробах воды, так и в фармацевтических продуктах и ​​продуктах питания..

Ленивые мутные и газообразные бульоны, полученные в предполагаемой фазе, должны быть повторно посажены в 2% ярко-зеленой желчи и ЕС бульоне.

Для полных колиформ ЕС бульоны инкубируют в аэробиозе в течение 24-48 часов при 37 ° С, а для фекальных колиформ они инкубируют в аэробиозе в течение 24-48 часов при 44 ° С..

В обоих случаях это интерпретируется следующим образом: мутные трубы с добычей газа считаются положительными. Если в течение 24 часов не производится газ, инкубация продолжается до 48 часов..

Положительные ЕС-бульоны переходят в полную подтверждающую фазу, которая состоит из пересева в селективных средах, таких как агар Mac Conkey, агар EMB или агар Endo..

Если используемый бульон модифицирован ЕС новобиоцином, положительные пробирки рекомендуется повторно засевать на агаре Mac Conkey с сорбитом..

Контроль качества

Контроль качества должен проводиться для каждой партии подготовленной среды. Во-первых, стерильность среды должна быть оценена. В этом смысле один или два бульона инкубируют без инокуляции при аэробиозе в течение 24 часов при 37 ° С. Ожидаемый результат - прозрачный бульон, без мутности и изменения цвета.

Во-вторых, следует оценить рост известных штаммов, для которых могут использоваться следующие бактерии: Кишечная палочка, ATCC 8739, Кишечная палочка ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Во всех случаях ожидается удовлетворительное развитие микробов, наблюдая мутный бульон с выделением газа для Кишечная палочка и без газа для сальмонеллы.

Другие штаммы, которые могут быть включены в контроль: Золотистый стафилококк ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Эти штаммы должны быть полностью подавлены.

рекомендации

-Размещение трубок Дарема имеет важное значение для изучения колиформ.

-Распределите среду в пробирках до стерилизации, а не после.

-Не используйте, если среда имеет более 3 месяцев подготовки.

-Не используйте, если есть какие-либо изменения в обычных характеристиках среды.

ссылки

  1. Лаборатории Британии. ЕС Средний. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  2. Кишечная палочка Энтерогеморрагическая. Центр продовольственной безопасности и общественного здоровья. 2010. Доступно по адресу: cfsph.iastate.edu
  3. Неоген Корпорация. Средний ЕС. Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
  4. Неоген. Средняя ЕС, модифицированная новобиоцином. Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Обнаружение, выделение и характеристика Кишечная палочка производитель токсина Шига из свежего говяжьего фарша из мясных магазинов в Консепсьоне, провинция Тукуман. Rev Microgol от Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Доступно по адресу: www.scielo.org.