Основа бульона лактозадо, приготовление и применение



лактозный бульон представляет собой жидкую неселективную культуральную среду, используемую в основном в качестве среды для предварительного обогащения при выделении штаммов сальмонеллы из микробиологического анализа, проведенного на обработанных пищевых продуктах, молочных продуктах или воде. Это рекомендовано Международной комиссией по микробиологическим характеристикам пищевых продуктов (ICMPF)..

Среда содержит ферментативное расщепление желатина, мясного экстракта и лактозы, веществ, необходимых для роста бактерий. Кроме того, лактоза является ферментируемым углеводом, поэтому некоторые колиформы способны расщеплять ее с образованием газа..

По этой причине бульон лактозы рекомендован Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для предварительного исследования общих и фекальных колиподобных бактерий, что делает его отличной альтернативой для замены трифтозного бульона лаурилсульфата в стандартной методике наиболее вероятного числа (NMP). ), используемый для микробиологического анализа проб пищевых, молочных и поверхностных вод, подземных, рекреационных, бытовых и промышленных отходов.

индекс

  • 1 фундамент
  • 2 Подготовка
  • 3 использования
    • 3.1 Предварительное обогащение
    • 3.2 Анализ общей и фекальной кишечной палочки
  • 4 Контроль качества носителя
  • 5 ссылок

фундамент

Для микробиологического анализа некоторых образцов необходима стадия предварительного обогащения, чтобы иметь возможность извлечь конкретный микроорганизм, который может быть в очень низком количестве или в неблагоприятных условиях, которые нарушают или минимизируют его жизнеспособность..

Так обстоит дело с сухими и обработанными продуктами, возможно загрязненными Salmonellas sp. В этих случаях, если бактерии присутствуют, они подвергаются физическому и химическому плохому обращению в процессе производства продукта..

Таким образом, что микроорганизмы подвергаются воздействию неблагоприятных факторов, таких как обезвоживание, воздействие ингибирующих или токсических продуктов, а также наложение, вызванное присутствием других бактерий в большем количестве, среди прочего..

В этом смысле бульон лактозы оказывает восстанавливающее действие на поврежденные структуры микроорганизма, заставляя его восстанавливаться и размножаться таким образом, чтобы его можно было обнаружить.

Аналогично, бульон лактозы обладает способностью разбавлять ингибирующие вещества, которые могут влиять на его жизнеспособность, позволяя его развитию. Кроме того, питательный состав лактозного бульона имеет стратегическое значение для роста Salmonella sp выше других микроорганизмов.

Для окончательной идентификации, это должно быть субкультивировано к другим средствам определенных культур.

С другой стороны, состав среды также позволяет обнаруживать лактозу, ферментирующую микроорганизмы, выделяющие газ..

подготовка

Для приготовления одного литра лактозного бульона взвесьте 13 граммов обезвоженной среды и растворите в 1000 мл дистиллированной воды..

Чтобы помочь растворить среду в воде, вы можете немного нагреть раствор, но не слишком сильно..

После получения гомогенного раствора раствор готовят следующим образом: если бульон используют для поиска колиформ, готовят штатив с пробирками и трубу для ферментации в Дареме переворачивают вверх дном..

Трубка Дарема является очень важной деталью, потому что она позволит обнаруживать образование газа, ценные данные при поиске колиформ.

Когда пробирки готовы, в них разливают 10 мл лактозного бульона, которого должно быть достаточно, чтобы покрыть всю пробирку Дарема..

Если бульон с лактозой будет использоваться в качестве бульона для предварительного обогащения, нет необходимости размещать пробирку для ферментации в Дареме. В этом случае требуется большее количество среды (225 мл), которая будет подаваться во флаконах по 500 мл с широкой горловиной и термостойкой винтовой крышкой..

Затем пробирки или колбы переносят в автоклав при 121 ° С на 15 минут..

Среда должна оставаться при конечном рН 6,9 ± 0,2 при 25 ° С..

Вина хранятся в холодильнике до использования.

Перед употреблением бульоны должны быть темперированы при комнатной температуре..

С другой стороны, бульон лактозы также можно приготовить в двойной концентрации.

Некоторые лаборатории добавляют бромкрезоловый пурпурный в лактозный бульон в качестве индикатора pH, чтобы показать пробирки, где произошла ферментация лактозы из-за изменения цвета. В этом случае бульон приобретает фиолетовый цвет, а в случае брожения желтеет.

приложений

В микробиологических лабораториях лактозированный бульон широко используется как относительно недорогая среда, которая дает надежные и быстрые результаты (24-48 часов)..

Он может быть использован для анализа общей и фекальной кишечной палочки в воде и пище или в качестве бульона для предварительного обогащения сальмонеллы.

Preenrichment

Предварительное обогащение является этапом, предшествующим обогащению образца, что значительно улучшает восстановление бактерий рода Salmonella в обработанных пищевых продуктах..

Для этого образец твердой пищи (25 г) или жидкости (25 мл) высевают в 225 мл лактозного бульона и инкубируют в течение 24-48 часов. Впоследствии селенитный цистиновый бульон или тетратионатный бульон будут пересеваться в обогащенную среду. Затем он переходит на выборочные носители XLD и SS.

Анализ общей и фекальной кишечной палочки

Это отличное средство как индикатор фекального загрязнения.

Таким образом, бульон с лактозой идеально подходит для предполагаемой фазы исследования колиформ методом наиболее вероятного числа..

Для образцов, в которых подозревается большое количество колиформ, будет инокулировано меньшее количество колиформ (1 мл), тогда как для образцов, в которых предполагается меньшее количество колиформ, инокулируется больший объем образцов (10 мл)..

Для анализа сделано 10 разведений-1, 10-2, 10-3, Формирование 3-5 трубок батареи для каждой использованной концентрации.

Из каждого разведения в бульон лактозы высевается одинаковый объем.

Пробирки инкубируют в течение 24 часов. Отрицательные бульоны инкубируют еще 24 часа.

Интерпретация результатов осуществляется путем наблюдения двух характеристик: первая - это наличие или отсутствие мутности, и, поскольку эта среда не содержит индикатор pH, цвет не будет меняться.

Второе - добыча газа или нет. Газ легко демонстрируется в трубе Дарема по появлению одного или нескольких пузырьков воздуха внутри.

Считается положительным, если наблюдаются обе характеристики, то есть мутность при добыче газа. Положительные пробирки следует повторно посеять в подтверждающую среду (бульон Brilliant Green 2% желчь и бульон EC).

Контроль качества среды

- При приготовлении среды важно не забыть разместить пробирки Даремса, если целью этого является изучение колиформ..

- Не перегревайте среду перед стерилизацией.

- Распределить в пробирках до стерилизации, никогда после.

- Не используйте, если среда имеет более 3 месяцев подготовки.

- Не используйте, если вы заметили какие-либо изменения в обычных характеристиках носителя.

- При приготовлении партии лактозного бульона, проверьте его качество, посадив штаммы, известные как Кишечная палочка, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii и Klebsiella pneumoniae. Они растут очень хорошо, с добычей газа (положительный контроль).

- Это может также включать Pseudomonas aeruginosa, сальмонелла Typhimurium или Enterococcus faecalis, которые хорошо растут, но без добычи газа (отрицательный контроль).

- Следует отметить, что исходный цвет обезвоженной среды - бежевый, а цвет среды - очень прозрачный и прозрачный желтый. Если есть изменение в цвете или внешнем виде, может быть ухудшение того же.

ссылки

  1. Асеведо Р., Севериче С., Кастильо М. Биология и микробиология окружающей среды. (2013) 1-е издание. Картахенский университет, Колумбия.
  2. Камачо А., Джайлс М., Ортегон А., Палао М., Серрано Б. и Веласкес О. (2009). Методы микробиологического анализа продуктов питания. 2-е изд. Химический факультет, УНАМ. Мексика.
  3. Лаборатории Конда Пронадиса. 2017. Лактозный бульон двойной концентрации (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Сравнение методов извлечения колиформных бактерий из озерного осадка Сочимилько, Мексика. Преподобный Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Доступно по адресу: scielo.org.
  5. Сотомайор Ф., Виллагра V, Кристальдо Г., Сильва Л., Ибаньес Л. Определение микробиологического качества артезианских колодезных вод районов центрального, центрального кордильерского и столичного муниципалитетов департаментов. Мем. Инст. Cienc. здоровье 2013; 11 (1): 5-14. Доступно с: scielo.iics.