Ярко-зеленая агаровая основа, подготовка и использование



ярко-зеленый агар Это твердая культуральная среда с высокой степенью селективности. Он используется исключительно для выделения штаммов рода Salmonella, однако есть некоторые исключения, такие как виды typhi и paratyphi, которые не растут в этой среде.

Поиски рода Salmonella часто встречаются в пробах фекалий, воды или пищи. В этом смысле эта среда может быть очень полезной. Этот агар был создан в 1925 году Кристенсеном, Лестером и Юргенсом, позже модифицированным Кауфманном.

Он состоит из плюрипептонов от пептического переваривания тканей животных и панкреатического расщепления казеина, также содержит дрожжевой экстракт, хлорид натрия, лактозу, сахарозу, феноловый красный, ярко-зеленый и агар-агар..

Он характеризуется тем, что является очень неблагоприятной средой для большинства бактерий, способствуя росту сальмонелл, однако некоторые колиформы способны существовать в нем, развиваясь слабо.

Важно подчеркнуть, что в этой среде род Shigella не растет, и ни Salmonella typhimurium, или Salmonella paratyphi. Поэтому, если желательно выделить эти микроорганизмы, следует использовать другие средства, такие как агар XLD, среди прочих..

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Ярко-зеленый агар
    • 1.2 Варианты ярко-зеленого агара (BGA)
  • 2 Подготовка
  • 3 Использование / применение
  • 4 Контроль качества
  • 5 ссылок

фундамент

Ярко-зеленый агар

Каждый из компонентов, составляющих среду, имеет определенную функцию, которая определяет характеристики и свойства агара..

Pluripeptonas и экстракт дрожжей являются источником питательных веществ, откуда микроорганизмы получают азот и минералы, необходимые для их развития. Лактоза и сахароза являются источниками энергии для микроорганизмов, способных их ферментировать..

Ярко-зеленый является ингибирующим веществом, которое предотвращает развитие грамположительных бактерий и большого количества грамотрицательных микроорганизмов..

Хлорид натрия обеспечивает осмотическую стабильность среды. В то время как феноловый красный является индикатором рН, он окрашивается в цвет при обнаружении продукции кислот в результате ферментации углеводов.

Неферментирующие колонии лактозы и сахарозы растут в этой среде белого цвета, розового или прозрачного, на красном фоне. Например, бактерии рода Salmonella.

В то время как лактозо-ферментирующие бактерии или сахароза способны расти в этой среде, они развивают зеленовато-желтые или зеленовато-желтые колонии на желто-зеленом фоне. Например, Escherichia coli и Klebsiella pneumoniae.

Варианты ярко-зеленого агара (BGA)

Есть и другие варианты ярко-зеленого агара; новобиоциновый зеленый агар с ярко-зеленой глюкозой (NBG) и новобиоциновый агар с ярко-зеленой глицериновой лактозой (NBGL).

Новобиоциновый агар ярко-зеленой глюкозы (НБС)

Содержит триптиказо-соевый агар, цитрат железа-аммония, пентагидрат тиосульфата натрия, феноловый красный, глюкозу, ярко-зеленый, новобиоцин и дистиллированную воду.

Служит для выделения колоний сальмонелл из образцов кала.

В этом случае ярко-зеленый и новобиоцин являются ингибирующими веществами, которые предотвращают рост грамположительных бактерий и некоторых грамотрицательных микроорганизмов..

Тиосульфат натрия является источником серы, а цитрат трехвалентного железа является источником железа, оба из которых необходимы для выявления образования сероводорода через образование черного осадка сульфида железа..

Глюкоза - это ферментируемый углевод, а феноловый красный - показатель pH..

В этой среде колонии сальмонелл развиваются большими с черным центром, окруженным красноватым ореолом и сопровождаемым четкой видимой областью. Некоторые штаммы Citrobacter freundii производить колонии, идентичные сальмонелле.

Ярко-зеленая новобиоциновая агаровая глицерин-лактоза (NBGL)

Эта среда содержит триптиказо-соевый агар, цитрат аммония-железа (III), тиосульфат натрия, лактозу, глицерин, ярко-зеленый, новобиоцин и дистиллированную воду..

Отличие этой среды от предыдущей заключается в том, что глюкоза заменяется лактозой, а глицерин и феноловый красный не используются..

Среда также используется для выделения видов сальмонелл, колонии развиваются черными, при производстве сероводорода.

Только колонии, которые не производят кислоту из глицерина или лактозы, достигают продукции H2Этого достаточно, потому что низкий pH мешает образованию H2S. Это приводит к бесцветным колониям для большинства видов Proteus и Citrobacter..

подготовка

-Весят 58 граммов коммерчески полученной дегидратированной среды. Добавьте его в литр дважды дистиллированной воды. Смешайте, дайте постоять несколько минут и передайте препарат источнику тепла, пока он полностью не растворится..

-Автоклав при 121 ° С в течение 15 минут, не превышающий время стерилизации.

-Дайте постоять и подавать даже горячим в стерильных чашках Петри. Конечный рН должен быть 6,9 ± 0,2.

-Дать застыть и хранить в холодильнике до использования. Перед посадкой тарелки следует принять комнатную температуру.

-Порошковая среда зеленого цвета и готова к оранжево-коричневому или красновато-зеленому цвету, в зависимости от pH и коммерческого дома. Очень коричневый цвет свидетельствует о том, что агар был перегрет.

-После затвердевания агара его не рекомендуется пересаживать, так как среда портится.

Использование / приложения

Эта среда используется для поиска штаммов рода Salmonella из образцов стула и молочных продуктов, среди других..

Поскольку это довольно неблагоприятная среда, рекомендуется использовать обильный инокулят, если используется прямой образец. В противном случае предварительное обогащение и обогащение образцов следует проводить до посадки в этой среде..

Поскольку некоторые штаммы сальмонеллы ингибируются или растут с трудом, рекомендуется сопровождать эту среду другими селективными агарами для сальмонеллы..

Все колонии с характерными сальмонеллами должны быть подвергнуты биохимическим тестам для окончательной идентификации.

Контроль качества

Чтобы проверить хорошее функционирование ярко-зеленой агаризованной среды, можно использовать штаммы АТСС, чтобы наблюдать за их развитием..

Наиболее часто используемые штаммы для контроля качества: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Кишечная палочка ATCC 25922,  Шигелла флекснери ATCC 12022, Золотистый стафилококк ATCC 6538.

Первые 3 должны давать розовые или прозрачные белые колонии на красном фоне. Сальмонелла с хорошим развитием и Proteus с редким или регулярным ростом.

Ожидается, что Klebsiella и Escherichia желтовато-желтые колонии с желтым фоном и в случае Shigella и Staphylococcus должны быть подавлены.

Обезвоженная среда должна храниться при комнатной температуре в сухом месте, потому что среда очень гигроскопична.

ссылки

  1. Дифко Франциско Сория Мелгуизо Лаборатория С.А. Блестящий зеленый агар. 2009
  2. Британская лаборатория Ярко-зеленый агар. 2015.
  3. БД Лаборатория. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Bailey & Scott. 12 изд. Аргентина. Panamericana S.A Редакция