Агар TSI основание, подготовка и использование



TSI агар или железный тройной сахарный агар - это твердая культуральная среда, которая служит биохимическим тестом для первоначальной идентификации грамотрицательных бактерий. Он основан на доказательстве ферментации присутствующих сахаров и производстве сероводорода и газа..

Его состав и основа очень похожи на железный тест Клиглера, с той разницей, что последний содержит только глюкозу и лактозу. Вместо этого, как следует из названия, тройное железо содержит три сбраживаемых углевода: глюкозу, лактозу и сахарозу..

Кроме того, среда TSI имеет четыре производных белка, которые делают его очень питательным агаром: дрожжевой экстракт, мясной экстракт, пептон и протеозный пептон. Он также содержит двухвалентный сульфат аммония, тиосульфат натрия, хлорид натрия, феноловый красный и агар.

Неспособность микроорганизма ферментировать глюкозу, присутствующую в среде, немедленно исключает его принадлежность к семейству Enterobacteriaceae. Следовательно, этот тест необходим для определения того, какой путь идентификации следует использовать для определения рода и вида..

Каждая лаборатория решает, работает ли она с агаром TSI или агаром Kligler..

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Хлорид натрия и агар
    • 1.2 показатель pH (феноловый красный)
    • 1.3 Производные белка (дрожжевой экстракт, мясной экстракт, пептон и протеозный пептон)
    • 1.4 Ферментация углеводов (глюкоза, лактоза и сахароза)
    • 1.5 Добыча газа
    • 1.6 Тиосульфат натрия и сульфат железа (2) (производство сероводорода)
  • 2 Подготовка
  • 3 использования
  • 4 отобранных
  • 5 ограничений
  • 6 Ссылки

фундамент

Каждое из соединений выполняет функцию в среде.

Хлорид натрия и агар

Хлорид натрия необходим для поддержания осмотического равновесия среды. В то время как агар дает твердую консистенцию.

Показатель рН (феноловый красный)

РН приготовленной среды сбалансирован до 7,3, а показатель рН (феноловый красный) становится желтым ниже 6,8. Это означает, что небольшое количество кислоты, образующейся в результате ферментации сахаров, превратит среду из красно-оранжевой в желтую..

Если ферментация не происходит, происходит подщелачивание среды с помощью пептонов, переходящих из красно-оранжевого в ярко-красный.

Производные белка (дрожжевой экстракт, мясной экстракт, пептон и протеозный пептон)

Когда бактерии метаболизируют белки, присутствующие в агаре TSI, образуются амины, которые подщелачивают среду (в основном на уровне скоса), потому что для реакции необходим кислород. Амины превращают лицевую панель в ярко-красный.

Но это будет зависеть от способности бактерий сбраживать углеводы или нет.

Ферментация углеводов (глюкоза, лактоза и сахароза)

Изучение сбраживания сахаров может дать несколько изображений, и каждое из них интерпретируется по-разному. Интерпретация теста делит микроорганизмы на 3 категории: не глюкозные ферментеры, не лактозные ферментеры и лактозно-сахарозные ферментеры..

Следует отметить, что количество глюкозы в среде ограничено, а концентрация лактозы и сахарозы в 10 раз выше.

Бактерии семейства Enterobacteriaceae и другие микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, начнут ферментировать этот сахар, поскольку он является самым простым углеводом для получения энергии..

С другой стороны, лактоза и сахароза являются сложными углеводами, которые должны расщепляться и превращаться в глюкозу, чтобы они могли войти в цикл Эмбдена-Мейерхофа..

-Неферментирующие глюкозу микроорганизмы

Когда инокулированный микроорганизм не способен ферментировать глюкозу, гораздо меньше может ферментировать другие углеводы. Следовательно, здесь не образуются кислоты, но в скосе образуется амин из-за использования пептонов..

В этом случае скос становится более сильным красным, а нижняя часть трубки может оставаться неизменной или подщелачиваться, оставляя всю красную трубку.

Интерпретация: K / K означает щелочной скос / щелочной или нейтральный фон

На изображении в начале статьи видно изображение трубки D.

Этот результат указывает на то, что микроорганизм не принадлежит к семейству Enterobacteriaceae..

-Неферментирующие микроорганизмы лактоза / сахароза

Если бактерии способны ферментировать глюкозу, но не лактозу или сахарозу, произойдет следующее:

Бактерия будет потреблять всю присутствующую глюкозу примерно через 6-8 часов, будучи способной подкислять скос и тако; то есть агар полностью пожелтел. Но когда глюкоза истощается и невозможность использовать лактозу и сахарозу, бактерии начинают метаболизм белков.

Эта реакция нуждается в кислороде, поэтому разложение пептонов происходит на поверхности (скос). Полученные амины подщелачивают лицевую панель, изменяя цвет с желтого на красный. Эта реакция подтверждается в 18-24 часов инкубации.

Интерпретация: K / A означает щелочной скос и кислотный тако.

На изображении, которое находится в начале статьи, видно изображение трубки B.

-Лактоза / сахароза, ферментирующие микроорганизмы

Очевидно, что микроорганизмы, способные ферментировать лактозу и сахарозу, могут ферментировать глюкозу. После того, как минимальное количество глюкозы, присутствующей в среде, исчерпано, образовавшийся пируват начинает метаболизироваться с образованием кислот в течение аэробного цикла Кребса, и в течение 8-12 часов вся среда будет желтой.

Если бактерии способны расщеплять лактозу или сахарозу, кислоты будут продолжать вырабатываться, и через 18–24 часа вся пробирка - клюв и тако - останется желтой.

Следует отметить, что использование глюкозы осуществляется двумя способами: один в аэробной форме в скосе трубки, а другой в анаэробной форме на дне трубки..

Интерпретация: A / A означает кислотный скос / кислотное дно. Может подавать газ или нет.

На изображении, которое находится в начале статьи, видно изображение трубки А.

Добыча газа

Некоторые микроорганизмы способны вырабатывать газ во время ферментации сахаров. Газ в трубе подтверждается давлением, которое он оказывает внутри агара. Давление вызывает образование пузырьков или смещение агара. Иногда газообразование может разрушить среду.

Важно, чтобы во время посева среды TSI прокол производился чисто центром агара до тех пор, пока он не достигнет дна. Если прокол отводится к стенкам трубы, это может привести к ложным срабатываниям при добыче газа, поскольку он выйдет через неправильно сформированный канал..

Для производства газа, а также реакций, происходящих в скосе агара, необходим кислород, поэтому рекомендуется покрывать трубку ватной пробкой, а если используется бакелитовая крышка, ее не следует полностью регулировать..

Добыча газа указывается как положительная (+) или отрицательная (-).

Тиосульфат натрия и сульфат железа (2) (производство сероводорода)

Бактерии, способные вырабатывать сероводород (бесцветный газ), берут серу тиосульфата натрия, присутствующего в среде. Как только Н сформирован2S реагирует с сульфатом железа (2), образуя сульфид железа (четко виден черный осадок).

Производство Н2S сообщается как положительный (+) или отрицательный (-).

На изображении, которое находится в начале статьи, видно изображение трубки C.

подготовка

Взвесьте 62,5 г агара с обезвоженным тройным сахаром (TSI) и растворите в одном литре дистиллированной воды..

Нагрейте, пока агар полностью не растворится. Варите минуту, часто помешивая. Распределить 4 мл среды в 13/100 пробирках с хлопковой крышкой.

Стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут. Вынуть из автоклава и дать отдохнуть наклонным способом. Необходимо позаботиться о том, чтобы основание и лицевая панель имели одинаковое расстояние.

Хранить в холодильнике 2-8 ° С. Разрешить закалить перед посадкой бактериального штамма.

Цвет обезвоженной среды светло-бежевый, а приготовленная среда красно-оранжевая

Конечный pH приготовленной среды составляет 7,3 ± 0,2..

приложений

Тест TSI широко используется на уровне лаборатории микробиологии. Этот тест необходим для определения типа теста, который должен применяться для определения рода и вида. Его хорошее исполнение и интерпретация могут сохранить материал и работу.

Если результатом является TSI K / K и тест на цитохромоксидазу является положительным, то известно, что тесты следует использовать для выявления неферментирующих грамотрицательных бацилл, таких как Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, среди других родов. Если это отрицательная оксидаза, она ориентирована на роды Acinetobacter, Stenotrophomonas и т. Д..

С другой стороны, если получен TSI A / A или K / A и тест на цитохромоксидазу отрицательный, чем больше нитратов восстанавливаются до нитритов, мы будем уверены, что это микроорганизм, принадлежащий к семейству Enterobacteriaceae. В этом случае маршрут идентификации будет ориентирован на конкретные тесты для этой группы бактерий..

С другой стороны, если получено изображение K / A или A / A и тест на цитохромоксидазу является положительным, дополнительные тесты, которые необходимо установить, будут направлены на выявление ферментирующих штаммов, не принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae, таких как: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio и Pasteurella.

TSI с сероводородом, отрицательной оксидазой, будет направлять идентификацию следующих родов семейства Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella или Salmonella.

TSI с дефицитным или умеренным содержанием сероводорода в щелочной фаске с щелочным дном и положительной оксидазой будет определять использование тестов для идентификации грамотрицательных неферментирующих бацилл, продуцирующих H2S, такой как Shewanella putrefaciens.

Наконец, TSI может быть использован для исследования продукции сероводорода в грамположительных бациллах, особенно при подозрении на это. Erysipelothrix rhusiopathiae.

посаженный

Среда TSI должна быть инокулирована чистыми колониями, выделенными в первичных или селективных культурах. Если колония отбирается из селективных сред, которые были засеяны пробами со смешанной флорой, следует позаботиться о том, чтобы взять только поверхность, так как в нижней части колонии в этой среде могут быть ингибированы жизнеспособные штаммы.

Следовательно, петлю никогда не следует охлаждать в селективной среде, чтобы затем взять колонию и инокулировать среду TSI..

Посадка будет производиться с помощью прямой петли или иглы. Будет сделан прокол, следя за тем, чтобы он проходил через центр середины, пока не достиг дна, а затем посадка была закончена, инокулируя поверхность зигзагообразно. Не делайте два прокола.

Инкубировать при 37 ° С в аэробиозе в течение 18-24 часов. Интерпретировать в это время, ни до, ни после.

ограничения

Тест TSI должен быть прочитан между 18 - 24 часами инкубации. Чтение до этого времени может дать ложный положительный результат брожения А / А. Принимая во внимание, что чтение после этого времени может привести к ложному отрицательному изображению неферментера из-за потребления пептонов, которые подщелачивают среду.

ссылки

  1. Mac Faddin J. (2003). Биохимические тесты для выявления бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос-Айрес Аргентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. 5-е изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  4. "TSI агар". Википедия, Свободная энциклопедия. 10 июля 2018 года, 08:09 UTC. 10 февраля 2019, 03:33 Доступно по адресу: en.wikipedia.org
  5. Лаборатории Британии. TSI Агар (тройной сахарный железный агар). 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  6. BD Laboratories Тройной сахарный железный агар (TSI Agar). 2003. Доступно на: bd.com