Agar Thayer Martin основа, подготовка и использование

Тейер Мартин Агар Это очень питательная и селективная твердая среда для выделения Neisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae; оба известны как патогенные или клинически важные Neisseria.

Одной из важнейших особенностей агара Thayer Martin является высокое содержание пищевых добавок. Это свойство является обязательным, потому что Neisserias являются очень требовательными микроорганизмами с точки зрения питания и, следовательно, не растут в обычных средах..

С другой стороны, поскольку эти микроорганизмы обычно обнаруживаются в нестерильных областях, необходимо добавлять ингибиторы, которые препятствуют росту сопровождающей флоры, не влияя на развитие рода Neisseria..

Этот агар состоит из базового агара GC, гемоглобина, дополнительных пищевых добавок и комплекса ингибирующих веществ (антибиотики и противогрибковые препараты). Коммерческие дома продают каждое из дополнений отдельно.

Образец, который будет высажен в этой среде, будет зависеть от микроорганизма, который ищется. в Neisseria гонореи Идеальными образцами являются вагинальные и уретральные выделения. В то время как для Neisseria meningitidis наиболее используемые образцы - CSF, глоточный и носоглоточный экссудаты.

индекс

• 1 фундамент
  • 1,1 GC базовый агар
  • 1.2 гемоглобин
  • 1.3 Дополнение обогащения
  • 1.4 Ингибиторы
• 2 Подготовка
  • 2.1 Оригинальный тейер Мартин Агар
  • 2.2 Агар Тейер Мартин модифицированный
• 3 Использование
• 4 Контроль качества
• 5 ограничений
• 6 Ссылки

фундамент

Neisserias - это микроорганизмы, классифицируемые как надоедливые, и поэтому их выделение затруднено. По этой причине Thayer Martín является сложной средой, и каждый из ее компонентов выполняет функцию, которая поясняется ниже:

GC основной агар

GC-агар содержит протеозный пептон, кукурузный крахмал, хлорид натрия, дикалийфосфат, монокалийфосфат и агар-агар. Его компоненты обеспечивают основные питательные вещества для развития микробов, нейтрализуют токсичные жирные кислоты, способствуют поддержанию осмотического баланса, определяют pH и обеспечивают твердую консистенцию для окружающей среды..

гемоглобин

Гемоглобин обеспечивает факторы V и X (никотинамид-аденин-динуклеотид NAD и гемин, соответственно). Следовательно, в этой среде виды Haemophilus также растут. Гемоглобин может быть получен коммерчески в дегидратированной форме или свежая дефибринированная бычья кровь может быть добавлена ​​к среде.

Дополнение обогащения

С другой стороны, добавка для обогащения должна быть добавлена ​​в среду Тейера-Мартина, поскольку питательные вещества, содержащиеся в базовом агаре, недостаточны для требований рода Neisseria..

Наиболее часто используемая добавка для обогащения называется изовиталекс. Он содержит глутамин, аденин, НАД, кокарбоксилазу, гуанин, нитрат трехвалентного железа, п-амино-бензойную кислоту, витамин В12, тиамин и глюкозу. Все эти соединения необходимы для правильного развития патогенной нейссерии.

ингибиторы

Поскольку это очень питательная среда, ингибиторы должны использоваться для предотвращения роста микроорганизмов обычной флоры области и, таким образом, способствовать выделению рода Neisseria..

Комплекс ингибиторов состоит из ванкомицина, колистина и нистатина. Ванкомицин ингибирует рост грамположительных бактерий, колистин предотвращает развитие грамотрицательных бактерий, таких как Pseudomonas и некоторые сапрофитные Neisseria, а нистатин действует на дрожжи как Candida Albicans.

Однако затем агар Тейера Мартина был модифицирован; изменения заключались в добавлении триметоприма, увеличении количества агара и добавлении дополнительной глюкозы. Эти изменения значительно улучшили восстановление видов Neisseria gonorrhoeae.

Следует отметить, что триметоприм ингибирует рост рода Proteus и его последующее образование роя. В этом смысле антибиотики - это то, что обеспечивает селективную природу среде Тейера Мартина..

подготовка

Оригинальный Тайер Мартин Агар

-ГК Агар

Взвесить 8,2 г обезвоженной среды GC и суспендировать в 100 мл. Смешайте и варите в течение 1 минуты при частом помешивании до полного растворения. Стерилизовать смесь в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут..

-2% гемоглобин

Взвесьте 2 г обезвоженного гемоглобина в 2 или 3 мл горячей дистиллированной воды до образования однородной смеси. Добавляйте понемногу больше воды, чтобы довести объем до 100 мл. Суспензия должна быть однородной перед стерилизацией.

Стерилизовать в автоклаве в течение 15 минут.

-Дополнение обогащения

Восстановите коммерческую дорогу разбавителем, предоставленным тем же коммерческим домом. Хорошо перемешать. Количество используемого разбавителя будет указано в инструкциях к набору..

-Ингибирующая добавка V.C.N (ванкомицин, колистин, нистатин)

Восстановите флакон с разбавителем, предоставленным коммерческим домом. Хорошо перемешать. Количество используемого разбавителя будет указано в инструкциях к набору..

-подготовленный

Для каждых 100 мл GC агара действуйте следующим образом:

Когда GC-агар покидает автоклав, дайте ему остыть до температуры примерно 50 ° C и добавьте 2 мл приготовленного раствора гемоглобина, 2 мл обогащающей добавки (изобиталекс или бриталекс) и 2 мл добавки для ингибирования. Смешайте и подавайте в стерильные чашки Петри.

Разрешить отвердеть и хранить в холодильнике до использования.

Цвет приготовленной среды - вишнево-красный. Конечный pH среды составляет 7,2 ± 0,2.

Модифицированный Тейер Мартин Агар

Взвесить 8,2 г обезвоженной среды GC и суспендировать в 100 мл. Добавить 1 г агара и добавить 0,3 г глюкозы. Смешайте и варите в течение 1 минуты при частом помешивании до полного растворения. Стерилизовать смесь в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут..

Приготовьте гемоглобин и добавку для обогащения, как описано выше.

Используемая ингибирующая добавка - V.C.N.T (ванкомицин, колистин, нистатин, триметоприм).

-подготовленный

Действуйте, как описано для оригинального агара Thayer Martin.

использование

Агар Тейера Мартина должен быть умерен перед посевом образцов. Обычно используемыми образцами являются экссудаты глотки, экссудаты носа, вагинальный, уретральный и / или ректальный секрет и CSF..

Используйте свежесобранные образцы и сделайте сильные прививки на агаре. Образцы высевают непосредственно при выгрузке материала, а затем рассасывают при истощении на поверхности..

Планшеты инкубируют при 35-37 ° С в течение 24-48 часов в микроаэрофильной банке (5% СО₂). В конце инкубационного периода чашки исследуют на наличие маленьких, серых, а иногда и слизисто-подобных колоний..

Провести грамотрицательные и подтверждающие биохимические исследования в подозрительных колониях.

Контроль качества

Для контроля качества агара Тейера Мартина можно использовать следующие микробные штаммы..

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 и Neisseria meningitidis ATCC 13090; у обоих штаммов ожидается удовлетворительное развитие.

Следующие штаммы также должны быть включены: Стафилококк эпидермидис ATCC 14990, Кишечная палочка ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 и Candida Albicans ATCC 10231. Во всех из них ожидается полное или частичное ингибирование в этой среде.

ограничения

-Следует иметь в виду, что бактерии, устойчивые к используемым ингибиторам, могут расти в среде..

-Есть штаммы Neisseria гонореи которая может быть чувствительной к концентрации используемого ванкомицина. По этой причине рекомендуется использовать шоколадный агар с добавлением изовиталекса параллельно, но без ингибиторов..

-Существуют штаммы дрожжей, устойчивые к нистатину, которые могут расти в этой среде и мешать выделению патогенных нейссерий, особенно гонококков..

ссылки

1. Valtek диагностические лаборатории. Агар Тайер-Мартин.2016. Доступно в: com
2. Лаборатории Британии. Thayer Martin Модифицированная среда. 2010. Доступно по адресу: britanialab.com
3. Участники Википедии. Тейер-Мартин Агар. Википедия, Свободная энциклопедия. 26 октября 2017 года, 16:33 UTC. Доступно по адресу: wikipedia.org4. По состоянию на 28 февраля 2019 г..
4. Лаборатории Британии. GC агар. 2010. Доступно по адресу: britanialab.com.
5. Лаборатории BBL ™ Среднего Обогащения для Fastidious Microorganizations. 1999. Доступно в: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.