Основание, подготовка и использование Agar TCBS



TCBS агар является высокоселективной и дифференцированной твердой культуральной средой, используемой для выделения и культивирования бактерий Vibrio, особенно Vibrio cholerae, V. vulnificus и V. parahaemolyticus в качестве основных патогенов этого рода.

Акроним TCBS означает тиосульфат цитрат желчной сахарозы. Этот агар также известен как селективная среда для Vibrios. Первоначальная формула была создана Наканиши, а затем изменена Кобаяси.

Он состоит из дрожжевого экстракта, мясного пептона, триптеина, цитрата натрия, тиосульфата натрия, бычьей желчи, сахарозы, хлорида натрия, цитрата трехвалентного железа, бромтимолового синего, тимолового синего и агара..

Этот состав позволяет адекватное развитие видов Vibrio из воды, фекалий и образцов пищи; кроме Vibrio hollisae, что не растет в этой среде. Кроме того, среда TCBS способна ингибировать рост других сопутствующих бактерий, особенно колиформных..

Из-за серьезных желудочно-кишечных и внеклеточных проблем, которые вызывают некоторые виды рода Vibrio, их диагностика очень важна. Человек заражается в основном при употреблении сырых или недоваренных морепродуктов или загрязненной воды, а также через раны.

В связи с этим клинические лаборатории должны включать агар TCBS при исследовании культур кала из жидких образцов кала, особенно при появлении рисовой воды. Особенно, если пациент сообщает, что контактировал с морской водой или употреблял морепродукты или рыбу.

индекс

  • 1 фундамент
  • 2 Подготовка
  • 3 Использование
  • 4 отобранных
  • 5 Ограничение
  • 6 Контроль качества
  • 7 ссылок

фундамент

Дрожжевой экстракт, мясные пептоны и триптейн являются питательным источником этой среды. Однако TCBS-агар является неблагоприятной средой для большинства бактерий..

Его высокая селективность определяется добавлением цитрата натрия и бычьей желчи; оба являются ингибирующими агентами, которые также обеспечивают щелочной pH среды, ограничивая рост сопровождающей флоры и способствуя росту V. cholerae, среди других видов. Следует отметить, что Vibrio cholerae очень чувствителен к изжоге.

Со своей стороны, хлорид натрия осмотически уравновешивается со средой. Кроме того, поскольку его концентрация высока, он также действует как ингибирующий агент, способствующий росту галофильных бактерий..

Сахароза является ферментируемым сахаром, который вместе с индикаторами pH синего цвета бромотимола и тимолового синего придает среде дифференциальный характер. По этой причине с помощью этого средства можно дифференцировать ферментирующие сахарозу штаммы от неферментирующих штаммов..

Колонии ферментирующих сахарозу штаммов приобретают желтый цвет и изменяют среду от зеленого до желтого из-за образования кислот. Неферментеры становятся прозрачными, а среда остается первоначального цвета (зеленый).

Аналогично, эта среда содержит тиосульфат натрия в качестве источника серы и цитрат трехвалентного железа в качестве раскрывающего агента. Оба показывают бактерии, способные производить сероводород (бесцветный газ). H2S образуется из тиосульфата, а затем при взаимодействии с цитратом трехвалентного железа образуется видимый черный осадок.

Наконец, агар - это то, что дает твердую консистенцию среде.

подготовка

Взвесьте 89 г обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Помогает растворению при нагревании и частом перемешивании. Смесь можно кипятить в течение 2 минут.

Эта среда не автоклавная. После растворения его подают прямо на стерильные тарелки. При затвердевании они располагаются в перевернутом виде в машинах для изготовления зубного налета и хранятся в холодильнике (2-8 ° C) до использования..

Среда после приготовления должна иметь рН 8,6 ± 0,2.

Цвет обезвоженной среды - светло-бежевый или зеленовато-бежевый, а цвет среды - лесной или голубовато-зеленый..

Перед высевом образцов важно оставить закаленные пластины.

использование

Наиболее распространенным образцом для выделения вибрионов являются диарея стул.

Образцы стула, если они не могут быть немедленно посеяны на селективной среде, должны транспортироваться в середине Кэри Блэр.

Чтобы повысить чувствительность культуры, фекалии можно пропустить через пептонную воду с pH 8,4 в качестве среды для обогащения в течение максимум 8 часов, после чего ее пересевают в среду TCBS..

Следует также иметь в виду, что некоторые штаммы Vibrios могут вызывать сепсис у пациентов с иммунодефицитом, поэтому они могут быть выделены из культур крови. Кроме того, образцы воды и пищи из моря могут быть проанализированы, когда есть эпидемические вспышки заболевания холерой.

посаженный

Инокулят исследуемой пробы должен быть заметным, посев производится методом исчерчения по метанию. Планшеты инкубируют при 37 ° С в течение 24 часов при аэробиозе..

Предполагаемые колонии Vibrio cholerae Они среднего размера, гладкие, непрозрачные, с тонкими краями и желтые, потому что ферментируют сахарозу..

Аналогичным образом, виды V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. Furnissii, V. metschnikovii и некоторые V. vulnificus. Другие виды Vibrios клинически важны как V. parahaemolyticus не ферментирует сахарозу, развиваясь в виде оливково-зеленых колоний.

С другой стороны, мы должны иметь в виду, что некоторые штаммы Aeromonas и Plesiomonas, которые являются оксидазой (+), могут расти в этой среде, создавая желтые колонии, которые могут запутать клинициста. В то время как некоторые штаммы Pseudomonas также оксидаза (+) растут как зеленые колонии, а также V. parahaemolyticus.

ограничение

Тест на оксидазу, положительный для рода Vibrio, никогда не должен проводиться на колониях, полученных из агара TCBS, так как полученный результат будет ложноотрицательным. Соединения в среде сильно мешают в этом тесте. Поэтому делать это надо из субкультур на кровяном агаре.

Контроль качества

Чтобы доказать, что среда находится в хорошем состоянии, рекомендуется посадить известные или сертифицированные контрольные штаммы и наблюдать, соответствует ли рост ожидаемым характеристикам..

Для этого используются штаммы:

-Vibrio cholerae - Удовлетворительный рост (желтые колонии, полупрозрачная граница).

-Vibrio parahaemolyticus - Удовлетворительный рост (колония с зеленым центром и полупрозрачной каймой).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - удовлетворительный рост (желтые колонии с гало одного цвета вокруг колонии).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - полное или частичное ингибирование (маленькие желтые или полупрозрачные колонии).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - частичное или полное ингибирование (синие колонии).

-Кишечная палочка ATCC 25922 - полностью заблокирован.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Полное или частичное ингибирование. (Маленькие колонии в центре зеленого полупрозрачного края).

Инкубация неинокулированной среды не должна иметь изменений.

ссылки

  1. Дифко Франциско Сория Мелгуизо Лаборатории. TCBS агар. 2009. Доступно по адресу: f-soria.es
  2. БД Лаборатория. BD. TCBS Agar 2003. Доступно на: bd.com
  3. Лаборатории Британии. TCBS Medium. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Агар. 2016. Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. 5-е изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.