Поделиться:
Фонд Агар Сабуро, подготовка и использование
Сабуро агар, Также известный как агар Сабуро с декстрозой, это твердая культуральная среда, особенно обогащенная для выделения и развития грибков, таких как дрожжи, плесень и дерматофиты..
Следовательно, в микробиологической лаборатории не может быть недостатка в средствах для исследования наличия патогенных или условно-патогенных грибов, как из клинических, так и неклинических образцов. Кроме того, он также идеально подходит для роста нитчатых бактерий, таких как Streptomyces и Nocardia. Его применение очень широкое, его можно применять в микологии человека, животных, растений и промышленности..
Эта среда была создана в 1896 году известным дерматологом Раймондом Сабуро, который стал всемирно известным специалистом по заболеваниям кожи головы, главным образом вызванным дерматофитами..
Его создание было настолько важным, что оно использовалось с тех пор и продолжается сегодня, хотя и с некоторыми изменениями..
Хотя это является особенным для грибов, в этой среде бактерии могут расти, поэтому для образцов со смешанной флорой требуется включение антибиотиков в их препарат и, таким образом, подавление роста бактериальной флоры, которая может присутствовать.
Выбор антибиотика должен быть сделан с осторожностью и с учетом типа гриба, который вы хотите восстановить, так как некоторые из них подавляются в присутствии определенных веществ.
индекс
- 1 фундамент
- 1.1 Наиболее часто используемые комбинации сабуро-декстрозного агара с антибиотиками
- 2 Подготовка
- 2.1 Декстроза Сабуро Агар
- 2.2 Сабуро-декстрозный агар (модификация Эммонса)
- 2.3 Сабуро-декстрозный агар (модификация Эммонса) с хлорамфениколом
- 2,4 декстроза Сабуро Эммонс агар с циклогексимидом
- 2,5 декстроза Сабуро Агар (Эммонс) с хлорамфениколом и циклогексимидом
- 2.6 Другие антибиотики, которые можно добавить
- 3 Особые соображения
- 4 Контроль качества
- 5 использует
- 5.1 Первичное выращивание
- 5.2 Споруляция
- 5.3 Сохранение
- 5.4 Микрокультуры
- 5.5 В микологии человека
- 5.6 Микология животных
- 5.7 Экологическая микология
- 5.8 Промышленная микология
- 5.9 Микология растений
- 6 Ссылки
фундамент
Сабуро-декстрозный агар является средой, которая в своем первоначальном составе является слабо селективной из-за кислотного рН 5,6 ± 0,2, однако бактерии все еще могут развиваться, главным образом в длительных инкубациях.
Среда содержит казеиновый пептон и пищеварительные ткани поджелудочной железы, которые обеспечивают источник углерода и азота для развития микроорганизмов..
Он также содержит высокую концентрацию глюкозы, которая служит источником энергии, способствуя росту грибков над бактериями. Все смешано с агар-агаром, компонентом, обеспечивающим правильную консистенцию.
С другой стороны, агар Сабуро с декстрозой может быть селективным при добавлении антибиотиков..
С антибиотиками это особенно полезно в образцах раны, открытых язвах или любых образцах, в которых подозревается большое бактериальное загрязнение.
Наиболее часто используемые комбинации сабуро-декстрозного агара с антибиотиками
-Агар Сабуро с хлорамфениколом: идеально подходит для восстановления дрожжей и нитчатых грибов.
-Агар Сабуро с гентамицином и хлорамфениколом: в этой среде произрастают практически все нитчатые грибы и дрожжи, а также подавляется большое количество бактерий, включая энтеробактерии, псевдомонады и стафилококки..
-Агар Сабуро с циклогексимидом: он особенно полезен для образцов с кожи или дыхательных путей, если подозрение вызывает диморфный гриб.
Циклогексимид следует использовать с осторожностью; Хотя он используется для подавления роста непатогенных или грибков окружающей среды и дрожжей, которые могут присутствовать в образце в качестве загрязняющих веществ, он также подавляет рост некоторых грибков, таких как Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp. И другие оппортунистические грибы.
-Агар Сабуро с хлорамфениколом и циклогексимидом: используется главным образом для выделения диморфных дерматофитов и грибов. Недостатком является то, что он подавляет некоторые виды грибков Кандида но альбиканс, Aspergillus, Zygomycetes или C. neoformans.
-Агар Сабуро с хлорамфениколом, стрептомицином, пенициллином G и циклогексимидом: он идеально подходит для образцов, сильно загрязненных бактериями и сапрофитными грибами, но имеет тот недостаток, что он ингибирует рост Actinomyces и Nocardias, в дополнение к оппортунистическим грибам, упомянутым выше.
подготовка
Если у вас есть ингредиенты отдельно, вы можете приготовить их следующим образом:
Декстрозный агар Сабуро
Сожаление:
- 40 гр декстрозы
- 10 г пептона
- 15 гр агар-агара
- Отмерьте 1000 мл дистиллированной воды
Все ингредиенты смешаны, pH доведен до 5,6. Растворить растворенные вещества путем кипячения, распределить 20 мл среды в пробирках 25 х 150 мм, без фланца и с хлопковым верхом, желательно.
Другие размеры труб также могут быть использованы, в зависимости от наличия.
Они автоклавируются в течение 10 минут в атмосфере давления (121 ° C). Не превышайте время автоклавирования. При выходе из автоклава трубки наклоняются с помощью опоры, пока они не затвердеют в пике канавки..
Другой способ - растворить ингредиенты, нагревая их до кипения. В той же автоклаве фиола в течение 10 минут, а затем распределяют 20 мл в чашках Петри.
Если доступна агаровая среда с декстрозой Sabouraud, которая уже содержит все ингредиенты, мы взвешиваем количество, указанное коммерческим предприятием, на один литр воды. Остальные этапы те же, что описаны выше..
Декстрозный агар Сабуро (модификация Эммонса)
Сожаление:
- 20 гр декстрозы
- 10 г пептона
- 17 гр агар-агара
- Отмерьте 1000 мл дистиллированной воды
Все ингредиенты смешаны, pH доведен до 6,9. Действуйте так же, как и в предыдущем случае.
Есть коммерческие дома, которые предлагают средний со всеми ингредиентами. В этом случае взвесьте и приготовьте, как описано во вставке..
Сабуро-декстрозный агар (модификация Эммонса) с хлорамфениколом
Маточный раствор хлорамфеникола
- Взвесьте 500 мг основания хлорамфеникола
- Отмерьте 100 мл 95% этанола
- микшировать
Агаровую среду с декстрозой Sabouraud (Emmons) готовят, как описано выше, и дополнительно на каждый литр среды добавляют 10 мл исходного раствора хлорамфеникола перед автоклавированием..
Декстрозный агар Сабуро Эммонс с циклогексимидом
Циклогексимид маточный раствор
- Весят 5 г циклогексимида
- Отмерьте 100 мл ацетона
- микшировать
Агаровую среду с декстрозой Сабуро (Эммонс) готовят, как уже описано, и дополнительно к каждому литру среды добавляют 10 мл исходного раствора циклогексимида перед автоклавированием..
Сабуро-декстрозный агар (Эммонс) с хлорамфениколом и циклогексимидом
Агаровую среду с сабуро декстрозой (Эммонс) готовят, как описано выше, и дополнительно к каждому литру среды добавляют 10 мл исходного раствора хлорамфеникола и 10 мл исходного раствора циклогексимида перед автоклавированием..
Другие антибиотики, которые можно добавить
От 20000 до 60000 единиц пенициллина на литр среды.
30 мг стрептомицина на литр среды.
Оба должны быть включены после автоклавирования среды, слегка охлажденной (50-55 ° C).
0,04 г неомицина на литр среды.
0,04 г гентамицина на литр среды.
Особые соображения
В целях безопасности предпочтительнее сажать декстрозный агар Сабуро в клиновидных пробирках (с наклоном в пике флейты), а не в чашках Петри, чтобы избежать рассеивания и вдыхания спор..
Важно, чтобы пробирки с агаром Сабура были покрыты хлопком, а не завинчивающейся крышкой, поскольку было показано, что полуэтаэробные условия препятствуют образованию спор, например, у некоторых штаммов. Coccidioides immitis. Кроме того, большинство грибов являются аэробными.
При использовании винтовой крышки не закрывайте плотно.
Контроль качества
Подготовленные носители должны иметь контроль качества для проверки их правильного функционирования. Для этого высевают определенные контрольные штаммы..
Для сабуро-декстрозного агара с хлорамфениколом могут использоваться штаммы ATCC. Candida Albicans, который должен иметь отличный рост. Еще одна пластинка инокулирована штаммами кишечной палочки, должен быть полностью заблокирован.
Инкубируют неинокулированную чашку, в которой не должен расти ни один микроорганизм.
Сабуро-декстрозный агар с хлорамфениколом и циклогексимидом могут быть использованы штаммы Трихофитон ментагрофиты, должен хорошо развиваться. Другая пластинка инокулирована штаммом Aspergillus flavus, в котором должен быть небольшой рост или отсутствие роста. Кроме того, инкубированный планшет инкубируют, чтобы продемонстрировать его стерильность..
Для сабуро-декстрозного агара с циклогексимидом, штаммы Candida Albicans, Трихофитон рубрум или Microsporum canis, который должен показать хороший рост.
Аналогично, штамм Aspergillus flavus, показывает скудный рост или нет роста. Наконец, инкубировать неинокулированный планшет для контроля стерильности.
приложений
Первичное выращивание
Классический сабуро-декстрозный агар содержит 4 грамма декстрозы и превосходен в качестве первичной изолирующей среды, поскольку показывает характерную морфологию каждого гриба..
Также отлично продемонстрировать производство пигментов. Однако это не самое подходящее средство для наблюдения за споруляцией.
Также не рекомендуется расти Blastomyces dermatitidis, который ингибируется высокой концентрацией присутствующей глюкозы.
С другой стороны, необходимо учитывать некоторые соображения.
Некоторые грибы развиваются лучше при комнатной температуре, такие как плесень, другие успешно развиваются при 37 ° C, как некоторые дрожжи, а другие могут развиваться при обеих температурах (диморфные грибы).
По этой причине иногда необходимо использовать несколько чашек с агаром Сабуро для одного и того же образца, поскольку их часто сажают в двух экземплярах, чтобы инкубировать одну чашку при комнатной температуре и другую чашку при 37 ° С..
Например, Sporothrix schenckii высевается в две тарелки; один инкубируется при комнатной температуре для получения фазы плесени, а другой - при 37 ° С для получения дрожжоподобной фазы, но в последнем необходимо добавить 5% крови в среду.
В других случаях, как и в образцах мицетом, высевают две чашки агара Сабура, одну с хлорамфениколом, а другую с циклогексимидом. Первый позволит выращивать возбудителей мицетом грибкового происхождения (Eumicetoma), а второй - возбудителей мицетом бактериального происхождения, таких как актиномицетомы..
спорообразование
Агар с декстрозой Сабуро, модифицированный Эммонсом, содержит 2 грамма декстрозы и используется не только для выделения, но также для споруляции и консервации грибов..
В этой среде, если вы можете восстановить штаммы Blastomyces dermatitidis.
сохранение
Для сохранения грибковых культур их можно хранить в холодильнике (2-8 ° С). Время хранения может варьироваться от 2 до 8 недель. По истечении этого времени они должны быть пересевы, чтобы повторить процесс.
Некоторые грибы лучше хранить при комнатной температуре, например Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum и Microsporum audounii.
Содержание штамма может быть увеличено, чтобы избежать плеоморфизма, если декстроза полностью удалена из агара и если количество агара в среде уменьшается, чтобы избежать сухости.
микрокультуры
Для выявления некоторых нитчатых грибов необходимо проводить микрокультуры с использованием агара Сабуро или других специальных средств для наблюдения за структурами полового и бесполого размножения..
В микологии человека
Он используется в основном для диагностики грибковых заболеваний, особенно тех, которые влияют на кожу и ее прикрепления (волосы и ногти).
Образцами могут быть выделения, экссудаты, кожа, волосы, ногти, мокрота, CSF или моча. Обычно выделяемыми патогенами являются дерматофиты, грибы, которые вызывают подкожные и системные грибковые инфекции..
Микология животных
Грибковые инфекции часто поражают животных, поэтому агар Сабуро так же полезен для животных, как и для микологии человека..
Например, дерматофиты могут часто поражать животных. Таков случай Microsporum canis var distortum, часто заражает собак, кошек, лошадей, свиней и обезьян. также, Микроспорум гипс заражает собак, кошек и крупного рогатого скота.
Птицы, такие как цыплята, петухи и цыплята, подвержены Microsporum gallinae.
Другие грибы, как Zymonema farciminosum, они также являются причиной заболеваний у животных, главным образом у лошадей, мулов и ослов, вызывая важное воспаление в лимфатических сосудах.
Sporothrix schenkii и Histoplasma capsulatum влияет на домашних и человеческих животных.
Экологическая микология
Многие патогенные или условно-патогенные грибы могут быть сконцентрированы в любой момент времени в определенной среде, особенно в операционных и отделениях интенсивной терапии (ICU) клиник и больниц. Поэтому необходимо контролировать их.
Другие уязвимые места - это библиотеки и старые здания, на которые может влиять концентрация грибков окружающей среды..
В экологических исследованиях сабуро декстрозный агар используется для выделения грибов.
Промышленная микология
Сабуро-декстрозный агар не может отсутствовать для изучения грибковых загрязнителей при производстве косметики, продуктов питания, напитков, кожи, текстиля и других.
Растительная микология
Растения также страдают от болезней, вызванных грибами, поражающими различные части растения, которые могут даже закончить сбор урожая, что приведет к большим потерям в сельском хозяйстве..
ссылки
- Куэнка М, Гадеа I, Мартин Э, Пеман Дж, Понтон Й, Родригес (2006). Микробиологическая диагностика микозов и исследования чувствительности к противогрибковым препаратам. Рекомендации Испанского общества инфекционных заболеваний и клинической микробиологии. Доступно по адресу: coesant-seimc.org
- Лаборатория ВальтеК. (2009). Сабуро декстрозный агар с циклогексимидом. Доступно по адресу: andinamedica.com.
- Наварро О. (2013). Ветеринарная микология. Национальный аграрный университет. Никарагуа.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Bailey & Scott. 12 изд. Аргентина. Panamericana S.A Редакция
- Касас-Ринкон Г. Общая микология. 1994. 2-е изд. Universidad Central de Venezuela, Библиотечное издание. Венесуэла, Каракас.