Папа декстроза основы, подготовка и использование

папа декстроза агар Это твердая неселективная питательная культуральная среда. Это может вырастить бактериальные и грибковые разновидности, но его использование указано особенно для изоляции нитчатых грибов и дрожжей. Он также известен как среда для КПК под английским выражением «Картофельный декстрозный агар»..

Это особенно полезно для выделения фитопатогенных грибов, то есть тех, которые поражают растения. Для посадки образцов из зараженных растений можно использовать другие среды, такие как агар Сабуро или мальтагар, однако для повседневного использования картофельный агар с декстрозой предпочтителен из-за большей споруляции..

Он также используется для подсчета грибковых колоний в образцах косметики, фармацевтических препаратов и некоторых молочных продуктов. Кроме того, выгодно сажать образцы соскобов кожи в поисках дерматофитов, которые очень хорошо растут в этой среде, развивая свои характерные пигменты.

Картофельная декстрозная среда очень проста и легка в приготовлении в лаборатории. Он содержит, как следует из названия, картофельный настой, декстрозу и агар-агар. Кроме того, могут быть добавлены ингибирующие вещества для предотвращения роста бактерий и повышения селективности в отношении грибковых видов..

индекс

• 1 фундамент
• 2 Подготовка
  • 2.1 - Домашнее (некоммерческое) приготовление папа-декстрозного агара
  • 2.2 - Коммерческое приготовление папар-декстрозного агара
• 3 использования
  • 3.1 Процесс посадки образцов растений на картофельный агар с декстрозой
  • 3.2 Способ посадки образцов кожных, волосяных или ногтевых чешуек на папа-декстрозном агаре
  • 3.3 Процедура идентификации
  • 3.4 Количество колоний
  • 3.5 Содержание грибковых штаммов
• 4 Контроль качества
• 5 ссылок

фундамент

Папа-декстрозный агар является питательной средой, которая обеспечивает необходимые питательные элементы для развития нитчатых грибов и дрожжей.

Комбинация картофельного настоя с глюкозой обеспечивает идеальный источник энергии для удовлетворительного роста грибов. В то время как агар является тот, который обеспечивает последовательность для окружающей среды.

Одна только среда не ингибирует рост бактерий, поэтому она является неселективной средой. Чтобы сделать его селективным, необходимо добавить ингибирующие вещества, такие как винная кислота или антибиотики..

подготовка

-Домашнее (некоммерческое) приготовление картофельно-декстрозного агара

Чашки Петри

Он готовится следующим образом:

Прежде всего, картофель очень хорошо моется, удаляя грязь, которая у него есть. Они нарезаются на тонкие ломтики со всем и нарезанные. 200 г картофеля взвешивают и помещают для кипячения в литр дистиллированной воды на полчаса.

По истечении времени фильтруется или процеживается весь препарат через марлю.

Полученная жидкость заполняется дистиллированной водой, пока не достигнет одного литра. К инфузии добавляют 20 г агар-агара и 20 г декстрозы, хорошо перемешивают и автоклавируют при 121 ° С, при 15 фунтах давления в течение 15 минут..

Дать остыть до 50 ° С и подавать в стерильных чашках Петри. Подготовленные тарелки хранятся в холодильнике.

упоры

Вы также можете приготовить дольки агара и декстрозы.

В этом случае перед стерилизацией в автоклаве в пробирки помещают от 12 до 15 мл среды, затем они автоклавируются и, оставляя, лежат на специальных опорах до полного затвердевания. Сохранить в холодильнике.

Среда остается pH 5,6 ± 0,2, однако некоторые лаборатории добавляют 10% винную кислоту для снижения pH до 3,1 ± 0,1, чтобы подавить рост бактерий..

В этом же смысле другие лаборатории предпочитают добавлять антибиотики, чтобы сделать их селективными для выращивания грибов и предотвратить развитие бактерий..

-Коммерческий препарат картофельно-декстрозного агара

Взвесьте 39 г коммерчески доступной обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Оставить в покое на 5 минут.

Смесь нагревают путем частого перемешивания до полного растворения. Затем стерилизуют в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут..

Пластины или клинья могут быть подготовлены. Действуйте как описано выше.

РН остается на уровне 5,6 ± 0,2. Если желателен рН 3,1, перед подачей на тарелки следует добавить 14 мл 20% стерильной винной кислоты..

Цвет неподготовленной среды - бежевый, а подготовленный - светло-янтарный со слегка мутным или опалесцирующим видом..

приложений

Способ посадки образцов растений на картофельный агар с декстрозой

-Для листьев с пятнами

Листья нарезаются на кусочки.

В стакан объемом 50 куб. См с 50% -ным спиртом поместите кусочки листьев (кусочки окрашенные и здоровые), чтобы продезинфицировать поверхность на 20-30 секунд. Вытяните спирт и добавьте 20% гипохлорита натрия на 40-50 секунд, если они тонкие, и увеличьте время до 80 секунд, если это кора и бревна..

Вытяните гипохлорит натрия и возьмите стерильным зажимом дезинфицированные кусочки и поместите их на поверхность среды (максимум 10 штук). Поместите дату и инкубируйте от 20 до 30 ° C.

-Для фруктов и клубней

Если плод мясистый, откройте плод, пораженный грибком, и возьмите кусочки стерильным скальпелем, как больную часть, так и здоровую часть, и поместите его на поверхность агара..

Если фрукт цитрусовый, такой как лимон или апельсин, вы должны открыть и посеять семена.

Когда поверхность плода поражена и наблюдаются споры, лучше всего использовать тертый метод на тарелке; это состоит в прикосновении к спорам с помощью шпателя в форме «L», стерилизованном и охлажденном, а затем в зигзагообразном посеве 2–3 раза на агаре.

-Для зерна

Их дезинфицируют, как описано в листьях, а затем помещают на агар..

-Для веток и стеблей

Выполняют соскабливание коры, а затем куски здоровой и больной части берут и высевают прямо на агар..

Посеянные чашки инкубируют при аэробиозе при 20-30 ° С в течение 72 часов..

Способ посадки образцов кожных, волосяных или ногтевых чешуек на папар-декстрозном агаре

Образец должен быть взят с помощью лезвия скальпеля № 11, чтобы срезать поврежденные волосы, кожные чешуйки или ногти в поисках дерматофитов. Перед взятием пробы участок необходимо продезинфицировать 70% спиртом..

-Образец кожи

При чешуйчатых поражениях края очага поражения должны быть соскоблены, так как есть больше шансов найти гриб.

При экссудативных поражениях образец отбирают сухим или влажным тампоном. Сеять сразу на картофельно-декстрозном агаре или сабуро-агаре. Избегайте транспортных средств.

Еще один метод отбора проб - это техника Мариат и Адан Кампос с использованием коврового покрытия. В этом случае пораженный участок протирают 5 раз кусочком стерильной шерсти для дальнейшего выращивания..

Образец может быть помещен непосредственно в культуральную среду.

-Образец волос

В зависимости от патологии пораженная часть может быть отрезана или оторвана корнями. Поместите образец в питательную среду.

-Образец ногтя

Вы можете поцарапать или порезать определенную часть пораженного ногтя. Это будет зависеть от типа травмы.

Перед посевом нарежьте образец на кусочки 1 мм, чтобы повысить вероятность контакта гриба с питательной средой..

Процедура идентификации

Полученные в чашке колонии выделяют в пробирки, содержащие картофельный агар с декстрозой, для проведения макроскопического исследования колоний (внешний вид, цвет, консистенция, степень развития)..

Микроскопическое исследование (наблюдение за структурами и их образованиями) может быть выполнено с помощью микрокультур или прямого наблюдения под микроскопом между пластинками и пластинками.

Количество колоний

Эта среда также может быть использована для определения нагрузки грибов и дрожжей, присутствующих в пробах растений, пищевых продуктах, косметике или лекарствах. Для этой цели используют агар с папа-декстрозой, дополненный антибиотиками, такими как: (хлорамфеникол, хлортетрациклин или оба).

Налейте 1 мл образца - предпочтительно разбавленного - в стерильную и пустую чашку Петри, затем растопите пробку из картофельного агара с декстрозой и дайте остыть до 45 ° C. Вылейте на чашку Петри и вращайте до гомогенизации. Оставьте это в покое, пока это не укрепляется.

Инкубируйте при аэробиозе при 20-25 ° C (плесень) или при 30-32 ° C (дрожжи) в течение 5-7 дней или более, в зависимости от типа искомого гриба и типа образца. Две чашки могут быть использованы для инкубации в обоих температурных диапазонах.

Содержание грибковых штаммов

Папа-декстрозный агар можно использовать для поддержания жизнеспособных штаммов грибов в течение нескольких лет..

Для этого гриб выращивают в дольках агара, декстрозы и папы, и после выращивания гриб покрывают минеральным маслом. Масло должно быть стерилизовано в автоклаве в течение 45 минут и иметь приблизительную вязкость от 300 до 330 сибольтов. Масло должно превышать коническую головку на 1-2 см.

Контроль качества

Из каждой подготовленной партии следует взять одну или две чашки и инкубировать при 25 ° С в течение 48 часов или при 20 ° С в течение 96 часов. Хороший контроль стерильности - это тот, в котором нет развития колоний.

Также известны или сертифицированы контрольные штаммы, такие как:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida Albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Трихофитон ментагрофиты ATCC 9533. Во всех случаях ожидается хороший рост.

ссылки

1. Лаборатории Британии. Папа глюкозадо агар. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
2. Неоген Лаборатории Картофельный декстрозный агар. Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
3. Лаборатория Инсумолаб Картофельный декстрозный агар. Доступно по адресу: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
5. Касас-Ринкон Г. Общая микология. 1994. 2-е изд. Universidad Central de Venezuela, Библиотечное издание. Венесуэла, Каракас.
6. Асейтуно М. Оценка микробиологического качества в тенях для век, компактный порошок типа национальной производственной лаборатории, в соответствии с справочным методом Фармакопеи Usp 2005. Диссертация на соискание звания фармацевтического химика. Университет Сан-Карлос-де-Гватемала.
7. Куэтара М. Обработка образцов поверхности. Ибероамериканский микологический журнал. 2007; стр. 1-12