Агар М.Р.С основание, подготовка и использование



агар М.Р.С. является селективной твердой культуральной средой, используемой для выделения и подсчета молочнокислых бактерий, особенно рода Lactobacillus. Этот агар был создан в 1960 году Маном, Рогозой и Шарпом, серединой, носящей то же имя, но из-за его сложности часто используется аббревиатура M.R.S..

Он состоит из протеозного пептона, мясного экстракта, дрожжевого экстракта, глюкозы, сорбитанмонолеата, дикалийфосфата, ацетата натрия, цитрата аммония, сульфата магния, сульфата марганца и агара..

Эта композиция позволяет правильно вырабатывать молочнокислые бактерии из клинических образцов, таких как кал, вагинальный секрет, оральные образцы и грудное молоко, а также молочные и мясные продукты..

Он не используется обычно в клинических лабораториях, потому что молочнокислые бактерии редко участвуют в патологических процессах. Однако использование агара M.R.S чаще в области пищевой микробиологии..

С другой стороны, эта среда используется в некоторых исследовательских центрах, целью которых является изучение молочнокислых бактерий..

индекс

  • 1 фундамент
  • 2 Подготовка
  • 3 использования
    • 3.1 Характеристика колоний
    • 3.2 Выделение молочнокислых бактерий
    • 3.3 Подсчет молочнокислых бактерий
    • 3.4 На уровне исследований
  • 4 Контроль качества
  • 5 ссылок

фундамент

Агар Человек, Рогоза и Шарп имеет довольно сложный состав. Разбивая функцию, которую выполняет каждый из ее компонентов, можно объяснить ее основу.

Протеозный пептон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт и глюкоза являются питательными веществами, которые обеспечивают источник углерода, азота, витаминов и минералов, необходимых для роста бактерий. Кроме того, глюкоза является универсальным источником энергии, используемым в большинстве питательных сред..

С другой стороны, чтобы способствовать росту молочнокислых бактерий, необходимо наличие необходимых кофакторов (катионов) в метаболизме Lactobacillus и родственных бактерий; Эти соединения представляют собой соли натрия, магния и марганца..

Аналогично, сорбитанмонолеат или полисорбат 80 являются источником важных жирных кислот, когда они поглощаются в качестве питательных веществ..

Кроме того, сорбитанмонолеат и цитрат аммония действуют, подавляя развитие сопутствующей флоры, особенно грамотрицательных бактерий, обеспечивая селективный характер этого агара..

Наконец, агар-агар - это то, что дает твердую консистенцию среде.

Существуют и другие варианты агара Man Rogosa Sharpe; одним из них является тот, в который добавлен цистеин (M.R.S.c), очень полезный для выделения бифидобактерий среди других микроорганизмов. С другой стороны, существует среда MRS с добавлением неомицина, паромомицина, налидиксовой кислоты и хлорида лития, особенно для селективного подсчета бифидобактерий в молочных продуктах..

подготовка

Взвесьте 68,25 грамма обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Дайте постоять 5 минут. Для полного растворения доведите до источника тепла, часто помешивая, и дайте кипеть 1-2 минуты. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут.

При выходе из автоклава дайте постоять несколько минут и распределите еще горячим в стерильных чашках Петри..

Дайте застыть и переверните пластины, закажите в досках и храните в холодильнике до использования. Разрешить пластины принять комнатную температуру перед их использованием.

РН среды должен составлять 6,4 ± 0,2. Некоторые коммерческие дома рекомендуют pH от 5,5 до 5,9.

Обезвоженная среда бежевого цвета, темный янтарь.

Обезвоженную среду и приготовленные чашки следует хранить при температуре от 2 до 8 ° C..

приложений

Агаровые пластинки М.Р.С. они могут быть посеяны на поверхности (истощение или с помощью шпателя Дригальски). Его также можно высевать по глубине. Планшеты следует инкубировать при 37 ° С в микроаэрофильной среде (4% О2 и 5-10% СО2) от 24 до 72 часов.

Метод посева выбирается в соответствии с преследуемой целью (изоляция или подсчет).

Характеристика колоний

Предполагаемые колонии Lactobacillus становятся беловатыми и имеют слизистый или кремовый вид на этом агаре. Тогда они должны определить.

Выделение молочнокислых бактерий

Для этого используется посадка на поверхности. Образцы для посадки требуют предыдущей процедуры. 

В случае образцов грудного молока рекомендуется центрифугировать 1 мл образца при 14000 об / мин в течение 10 минут, чтобы удалить жировой слой. 900 мкл отбрасывают, а в оставшихся 100 мкл осадок суспендируют и выливают на M.R.S. Затем его нужно равномерно распределить с помощью шпателя Дригальски..

В случае образцов кала один (1) грамм фекалий взвешивают и гомогенизируют в 9 мл 0,1% стерильной пептонированной воды, что соответствует разведению 1/10. Затем производят серийные разведения, пока не будет получено окончательное разведение 10-4.

Наконец, 100 мкл разведений 10 взяты-2, 10-3 и 10-4 и каждое разведение высевают на агар MRS, равномерно распределяя с помощью шпателя Дригальски..

Подсчет молочнокислых бактерий

В этом случае посев производится по глубине.

Для образцов грудного молока возьмите 1 мл и поместите его в стерильную коническую пластиковую пробирку. MRS-агар добавляют при температуре приблизительно 40 ° С до конечного объема 25 мл, получая гомогенную смесь. Затем его равномерно разливают в стерильные чашки Петри и дают постоять до полимеризации..

Разведения для образцов стула, как описано выше. Возьмите 1 мл каждого разведения и поместите в стерильные конические пластиковые пробирки. Расплавленный агар MRS добавляют до объема 25 мл..

Смесь каждого разведения равномерно разливают в стерильные чашки Петри. Наконец дайте ему постоять до его полимеризации.

На уровне исследований

С каждым днем ​​изучение молочнокислых бактерий становится все интереснее; особенно исследователи стремятся узнать новые штаммы и их потенциал в качестве инициирующих ферментов для стандартизации при производстве молочных продуктов, среди прочего.

В этом смысле Alvarado et al. (2007) использовали агар М.Р.С. провести исследование, в котором были выделены, идентифицированы и охарактеризованы молочнокислые бактерии, присутствующие в копченом венесуэльском сыре ремесленника.

В сыре они обнаружили присутствие бактерий родов Lactococcus и Lactobacillus и пришли к выводу, что смеси изолированных штаммов пригодны в качестве стартовых штаммов при производстве сыров из пастеризованного молока..

С другой стороны, Санчес и соавт. (2017) использовали агар M.R.S. исследовать наличие молочнокислых бактерий в пищеварительном тракте поросят, чтобы использовать их в качестве нативных пробиотиков, повышающих продуктивность здоровых поросят.

С помощью этой среды им удалось выделить четыре вида: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae и Pediococcus pentosaceus.

Аналогичным образом, Баес и соавт. (2019) использовали агар М.Р.С. оценить молочнокислые бактерии (БАЛ) и бифидобактерии с пробиотическим потенциалом в грудном молоке и кале у младенцев.

Им удалось выделить 11 БАЛ и 3 Bifidobacteria sp в грудном молоке и 8 бал и 2 Bifidobacteria sp. в стуле Все соответствовали определенным параметрам, которые приписывают им бактерии с пробиотической активностью..

Авторы пришли к выводу, что как грудное молоко, так и фекалии исключительно грудных детей служат естественными источниками пробиотических бактерий..

Контроль качества

Для оценки качества М.Р.С. Контрольные штаммы могут быть использованы, такие как:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Бифидобактерия Бифидум ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli и Bacillus cereus.

Ожидаемые результаты - удовлетворительный рост для первых 6 бактерий, в то время как Кишечная палочка и Bacillus cereus должны быть полностью заблокированы.

ссылки

  1. Альварадо С, Чакон Z, Отониэль Дж, Герреро Б., Лопес Дж. Выделение, идентификация и характеристика молочнокислых бактерий из копченого венесуэльского сыра Андского производства ручной работы. Его использование в качестве начального культивирования. Cient. (Маракайбо) 2007; 17 (3): 301-308. Доступно по адресу: scielo.org.
  2. Санчес Х., Фабиан Ф., Очоа Г. Альфаро. Выделение молочнокислых бактерий из пищеварительного тракта поросенка. Преподобное расследование ветеринарный Перу 2017; 28 (3): 730-736. Доступно по адресу: scielo.org.
  3. Баез Э., Гонсалес Г., Эрнандес Г., Лопес Е., Мега М. Оценка молочнокислых бактерий и бифидобактерий с пробиотическим потенциалом в грудном молоке и кале у детей в муниципалитете Асеведо, Миранда 2017. Бакалавриат готовится к получению степени бакалавра в биопробы. Университет Карабобо, Венесуэла.
  4. Британская лаборатория М.Р.С агар. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  5. Участники Википедии. MRS агар Википедия, Свободная энциклопедия. 10 января 2018 года, 19:44 UTC. Доступно по адресу: wikipedia.org По состоянию на 17 февраля 2019 г..
  6. Рой Д. Среда для выделения и подсчета бифидобактерий в молочных продуктах. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.