Agar LIA (Lysine Iron) основа, подготовка и использование



ЛИА Агар (Lysine Iron) - это биохимический тест, используемый для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae. Эта среда была создана Эдвардсом и Файфом по формуле Фалькова..

Первоначально этот тест представлял собой бульон, содержащий пептоны, дрожжевой экстракт, глюкозу, L-лизин, бромкрезоловый пурпурный и дистиллированную воду. Эдвардс и Файф добавили агар-агар, цитрат аммония железа (III) и тиосульфат натрия.

Тест в основном состоит из демонстрации присутствия фермента лизиндекарбоксилазы, способного реагировать с карбоксильной группой аминокислоты L-лизина. Дезаминирование аминокислоты также может происходить из-за присутствия фермента лизин-деаминазы.

Кроме того, состав среды позволяет продемонстрировать способность некоторых родов бактерий продуцировать сероводород. Наконец, также можно наблюдать генерацию или нет газа в середине.

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Пептоны и дрожжевой экстракт
    • 1,2 глюкозы
    • 1,3-L-лизин
    • 1.4 Индикатор pH (бромкрезоловый фиолетовый)
    • 1.5 Цитрат аммония железа и тиосульфат натрия
  • 2 Интерпретация теста
    • 2.1 Декарбоксилирование лизина
    • 2.2 Дезаминирование лизина
    • 2.3 Производство сероводорода (H2S)
  • 3 Запись результатов
  • 4 Подготовка
  • 5 использует
  • 6 Ссылки

фундамент

Пептон и дрожжевой экстракт

Как и большинство питательных сред, железо-лизиновый агар содержит компоненты, которые обеспечивают источник питательных веществ, необходимых для роста бактерий. Эти компоненты представлены пептонами и дрожжевым экстрактом..

глюкоза

Также этот агар содержит ферментируемую углеводную глюкозу. Известно, что все бактерии семейства Enterobacteriaceae сбраживают глюкозу.

Этот этап имеет решающее значение, поскольку он будет отвечать за подкисление среды, что является необходимым условием для фермента лизиндекарбоксилазы, если он присутствует, для воздействия на ее субстрат.

В некоторых бактериальных родах можно наблюдать образование газа за счет ферментации глюкозы..

Об этом свидетельствует газ, когда в трубке происходит смещение агара, оставляя пустое пространство на дне трубки, или путем разрыва среды на две или более порций..

L-лизин

Как только лизин декарбоксилирован, образуются диамин (кадаверин) и диоксид углерода.

Декарбоксилирование происходит в присутствии кофермента пиридоксальфосфата. Эта реакция необратима.

Индикатор рН (бромкрезоловый фиолетовый)

Все изменения рН, происходящие в среде по различным реакциям, обнаруживаются индикатором рН бромкрезолового пурпурного.

В этом смысле, когда происходит подкисление, среда становится желтой, а когда происходит подщелачивание, среда возвращается к исходному фиолетовому или фиолетовому цвету..

Когда происходит дезаминирование лизина в присутствии фермента лизин-деаминазы, на поверхности образуется красноватый цвет, типичный для родов Proteus, Providencia и некоторых видов Morganella..

Это связано с тем, что в процессе дезаминирования образуется альфа-кетокарбоновая кислота, которая реагирует с цитратом аммония в присутствии кислорода, что вызывает вышеуказанный цвет.

Цитрат аммония железа и тиосульфат натрия

С другой стороны, о бактериях, которые производят сероводород, будет свидетельствовать присутствие тиосульфата натрия (источник серы) и цитрата аммония железа (III), который является проявителем H2S.

Бактерии, обладающие ферментом тиосульфатредуктазой, обладают способностью действовать путем уменьшения присутствующего тиосульфата натрия с образованием сульфита и сероводорода (H2S).

Последний представляет собой бесцветный газ, но когда он вступает в реакцию с солью железа, образуется металлический сульфид железа, который представляет собой нерастворимое соединение (видимый черный осадок).

Тем не менее, способность образования H2S с этой средой не очень надежен, потому что некоторые отрицательные лизиндекарбоксилазные бактерии способны продуцировать H2S не будет образовывать черный осадок, потому что кислотность среды мешает. Поэтому рекомендуется проверить с другими средствами, которые содержат железо.

Интерпретация теста

Декарбоксилирование лизина

Пробирки следует прочитать после окончания 24-часовой инкубации, в противном случае существует риск неверного толкования реакции, сообщая о ложноотрицательных результатах..

Следует помнить, что первой реакцией будет сбраживание глюкозы, поэтому все пробирки через 10-12 часов станут желтыми.

Если в конце инкубационного периода (24 часа) наблюдается желтый фон с пурпурной или пурпурной поверхностью, реакция отрицательная. Фиолетовый цвет поверхности соответствует подщелачиванию среды с помощью пептонов.

Положительная реакция - это реакция, при которой дно и поверхность трубки полностью фиолетового цвета, то есть возвращается к исходному цвету..

Поэтому тот, кто определяет положительность теста, является основанием или дном носителя. Если у вас есть сомнения по поводу цвета, вы можете сравнить его с не привитой трубкой LIA.

Дезаминирование лизина

Трубка, которая свидетельствует о дезаминировании лизина, будет иметь красновато-коричневую поверхность и желтый фон (кислоту) или всю красновато-коричневую трубку..

Эта реакция интерпретируется как отрицательная для декарбоксилирования лизина, но положительная для дезаминирования лизина.

Эта реакция определяется и интерпретируется в скосе.

Производство сероводорода (ч2S)

Положительная реакция наблюдается по появлению черного осадка во всей или части среды. Обычно между границей скоса и основанием.

Если осадок происходит по всей трубе, он не будет показывать другие реакции, которые происходят в среде.

Запись результатов

При интерпретации теста результаты записываются следующим образом:

Сначала прочитайте скос, затем дно или тако, затем производство H2S, и, наконец, добыча газа.

Пример: K / A + (-). Это значит:

  • K: щелочной ободок (фиолетовый)
  • A: Кислотный (желтый) фон, то есть отрицательная реакция декарбоксилирования и отрицательное дезаминирование..
  • +: Производство сероводорода
  • (-): без газа.

подготовка

Взвесьте 35 г лизина в агаре обезвоженного железа и растворите в одном литре дистиллированной воды..

Нагревайте, пока агар полностью не растворится, поэтому варите его в течение минуты, часто помешивая. Распределить 4 мл среды в 13/100 пробирках с хлопковой крышкой.

Стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут. Извлеките из автоклава и дайте отдохнуть в наклонном положении, таким образом, чтобы было глубокое основание и короткий скос.

Хранить в холодильнике 2-8 ° С. Разрешить закалить перед посадкой бактериального штамма.

Цвет обезвоженной среды - бежевый, а среда - красновато-фиолетового цвета..

Конечный pH приготовленной среды составляет 6,7 ± 0,2.

Среда становится желтой с рН, равным или меньшим 5,2, и пурпурной при рН 6,5 и выше.

приложений

Этот тест, вместе с другими биохимическими тестами, используется для идентификации бацилл семейства Enterobacteriaceae..

Среду высевают прямой петлей или иглой, один или два пуансона делают на дно пробирки, а затем поверхность среды зигзагообразно..

Его инкубируют в течение 24 часов при 35-37 ° С при аэробиозе. При необходимости его оставляют на инкубирование еще на 24 часа..

В основном полезно отличать виды лактозы Citrobacter от Salmonellas sp.

ссылки

  1. Mac Faddin J. (2003). Биохимические тесты для выявления бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос-Айрес Аргентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. 5-е изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  4. Лаборатории Британии. Лизин железный агар. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Лизин Железный Агар Сланц. 2007. Доступно по адресу: bd.com
  6. Valtek Laboratories Средний Л.И.А. 2009. Доступно по адресу: andinamedica.com