Agar Hektoen Foundation, подготовка и использование



Гектоен Агар или кишечный агар Hektoen представляет собой твердую, селективную и дифференцированную культуральную среду. Он был создан в Институте Гектоена Кингом и Метцгером для изоляции энтеропатогенных бактерий родов Shigella и Salmonella..

Среда состоит из протеозного пептона, дрожжевого экстракта, желчных солей, лактозы, сахарозы, салицина, тиосульфата натрия, хлорида натрия, цитрата железа, цитрата аммония, бромтимолового синего, фуксина кислоты и агара. Эта формула позволяет дифференцировать роды Shigella и Salmonella от остальных бактерий, способных расти в этой среде..

Хотя существуют и другие средства с той же функцией, что и на агаре Гектоена, это дает большее преимущество по сравнению с другими средствами, особенно когда вы хотите восстановить виды шигелл.

Виды обоих родов вызывают серьезные желудочно-кишечные проблемы у людей из-за употребления загрязненной пищи; поэтому передача фекально-оральная. Вот почему использование агара Hektoen в основном показано в микробиологическом анализе образцов стула и пищи..

индекс

  • 1 фундамент
  • 2 Подготовка
  • 3 Использование
  • 4 Контроль качества
  • 5 ограничений
  • 6 Ссылки

фундамент

Агар Hektoen содержит пептоны и дрожжевой экстракт в качестве источника питательных веществ, обеспечивая необходимые элементы для развития микробов.

Тем не менее, он также имеет желчные соли, которые действуют, подавляя рост некоторых бактерий, особенно грамположительных и некоторых грамотрицательных. Именно по этой причине он считается селективной средой.

С другой стороны, агар Гектоен является дифференциальной средой. Это свойство обеспечивается наличием сбраживаемых углеводов, таких как лактоза, сахароза и салицин, а также системой индикаторов pH, представленной бромтимоловым синим и кислым фуксином..

Все бактерии, способные расти в этой среде, которые не принадлежат к роду Salmonella и Shigella, будут развивать лососевые или оранжевые колонии, за исключением рода Proteus. Это связано с ферментацией одного или нескольких присутствующих углеводов, которые подкисляют среду, что приводит к повороту индикатора pH.

Со своей стороны, род Shigella и Salmonella не способны ферментировать ни один из присутствующих углеводов, используя в качестве источника энергии только пептоны, которые подщелачивают окружающую среду, и поэтому его колонии имеют сине-зеленый цвет..

Также в этой среде можно выделить бактерии, способные образовывать сероводород (бесцветный газ). Тиосульфат натрия действует как источник серы, а цитрат железа - раскрывающий агент. Оба соединения делают возможным образование черного осадка сульфида железа, что свидетельствует о реакции.

Черный осадок в центре колонии с прозрачным ореолом вокруг создает вид рыбий глаз. Эта характеристика свидетельствует о наличии рода Salmonella.

Наконец, хлорид натрия поддерживает осмотический баланс, а агар придает твердую консистенцию среде.

подготовка

Взвесьте 76 г обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Энергично встряхните смесь и оставьте на 10-15 минут. Это может быть нагрето и вскипячено, давая вращательные движения до полного растворения. Этот носитель не автоклавирован.

Когда среда достигает температуры приблизительно 45 ° C, объем 20 мл непосредственно наливают в стерильные чашки Петри..

Агару дают затвердеть. В это время они готовы к использованию. Желательно использовать их немедленно. Если они невозможны, их следует хранить в холодильнике до использования..

Тарелки следует вынимать из холодильника как можно раньше, прежде чем сажать их до комнатной температуры..

PH среды должен составлять 7,5 ± 0,2. Цвет обезвоженной среды - фиолетовый, а приготовленный - коричневато-зеленый..

использование

Использование агара Hektoen рекомендуется для поиска бактерий рода Shigella и Salmonella в образцах стула и пищи..

Возможность выделения этих бактерий значительно возрастает, если образец предварительно обогащен специальными бульонами, такими как селенитовый бульон, селенитовый цистиновый бульон, тетратионатный бульон и т. Д..

Инокулят должен быть прочным, а посев производится через полосатость. Планшеты инкубируют при 37 ° С в течение 24-48 часов при аэробиозе..

Инкубация рекомендуется в течение 48 часов, потому что характеристики колоний более ясны для их интерпретации и дифференциации в настоящее время..

Контроль качества

Для проведения контроля качества на этой среде используются сертифицированные бактериальные штаммы, такие как: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Шигелла флекснери ATCC 12022 и Шигелла Сонней ATCC 25931.

Ожидаемые результаты следующие: Salmonella typhimurium и  Salmonella enteritidis они должны развивать зелено-голубые колонии с черным центром или без него. В то время как виды Shigella будут расти как сине-зеленые колонии.

Вы также можете включить штаммы Кишечная палочка ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 и Золотистый стафилококк ATCC 25923.

В этих случаях наблюдаемые характеристики следующие: Кишечная палочка и K. pneumoniae В этой среде они разовьют лососево-оранжевые колонии с осадком того же цвета вокруг них. Между тем, Proteus будет развивать сине-зеленые колонии с черным центром или без него.

в то время как S. aureus и  E. faecalis должно быть подавлено, иногда E. faecalis удается расти как желтые колонии, очень маленькие.

С другой стороны, поскольку эта среда не стерилизуется в автоклаве, важно оценить стерильность среды. Поэтому каждую подготовленную партию следует инкубировать от одной до двух чашек без инокуляции при 37 ° С в течение 24 часов при аэробиозе..

Очевидно, ожидается, что на пластине не будет никакого роста.

ограничения

-Виды Proteus могут развиваться в этой среде, и характеристики их колоний можно спутать с видами Salmonella или Shigella. По этой причине любая подозрительная колония должна быть подтверждена биохимическими тестами..

-Использование этой среды необходимо сопровождать другими менее селективными агарами, потому что, если искомый микроорганизм обнаружен в низких концентрациях, он может не развиваться в этой среде..

-Не перегревайте при его приготовлении, так как излишнее тепло меняет состав среды.

-Необычно колонии сальмонеллы, бродящие по лактозе, могут остаться незамеченными.

ссылки

  1. Участники Википедии. Гектоен кишечный агар. Википедия, Свободная энциклопедия. 13 марта 2019 года, 23:38 UTC. Доступно по адресу: .wikipedia.org / Доступ 16 марта 2019 г..
  2. BD Laboratories Б. Д. Гектоен кишечно-кишечный агар (HE агар). 2013. Доступно по адресу: bd.com
  3. Лаборатории Британии. Гектоен кишечно-кишечный агар. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  4. Дифко Франциско Сория Мелгуизо Лаборатории. Агар Гектоен Агар. Доступно по адресу: f-soria.es
  5. Руководство Difco & BBL, кишечный агар Hektoen. 2-е издание. Доступно по адресу: bd.com/europe