Агар Эндо фундамент, подготовка и использование



Эндо Агар или среда Endo представляет собой твердую, дифференцированную культуральную среду с определенной степенью селективности. Первоначальная формула была создана компанией Endo в 1904 году, чтобы дифференцировать бактерии, лактозные и ферментирующие лактозу. В начале это было разработано для изоляции Salmonella typhi, но позже целью медиума стал поиск колиформ.

Принцип эндо-агара был сохранен, но его формулировка претерпела бесчисленные изменения за эти годы. В настоящее время среда состоит из расщепленной пептидами животной ткани, лактозы, гидрокарбоната дикалия, сульфита натрия, основного фуксина и агара..

Основное использование среды было связано с выделением и дифференцировкой грамотрицательных бацилл, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae и другим близлежащим семействам..

В течение долгого времени он использовался для обнаружения колиформ в пробах воды, молочных продуктов и пищевых продуктов, но в настоящее время использование этой среды было вытеснено другими аналогичными функциями. Тем не менее, некоторые микробиологические лаборатории используют этот агар для выделения энтеробактерий из образцов клинического происхождения..

индекс

  • 1 фундамент
  • 2 Подготовка
    • 2.1 Эндо-агар
    • 2.2 Вариант агара м-эндо
  • 3 Использование
  • 4 Контроль качества
  • 5 ограничений
  • 6 Ссылки

фундамент

Эндо-агар содержит пептоны, которые служат источником аминокислот, азота, углерода и энергии, необходимых для роста нетребовательных микроорганизмов..

С другой стороны, слегка селективный характер агара обеспечивается добавлением сульфита натрия и основного фуксина; оба компонента частично или полностью подавляют развитие большинства грамположительных бактерий.

Дифференциальный характер определяется наличием сбраживаемого углевода, который в данном случае представляет собой лактозу и основной фуксин, который также служит индикатором рН.

Грамотрицательные бактерии, которые растут на этом агаре и способны ферментировать лактозу, образуют сильные розовые колонии; быть патогномоничным Кишечная палочка образование темно-красных колоний с переливчатым зеленым металлическим блеском. Это связано с высокой выработкой кислот при ферментации углеводов.

Следует отметить, что среда вокруг колоний также приобретает ярко-розовый цвет. В то время как неферментирующие грамотрицательные бактерии из лактозы образуют бледно-розовые колонии, похожие на средние или бесцветные.

Бикарбонат натрия и калия уравновешивает pH среды, а агар является компонентом, обеспечивающим твердую консистенцию.

подготовка

Эндо Агар

Взвесить 41,5 г обезвоженной среды и растворить в 1 л дистиллированной воды. Нагрейте смесь, часто помешивая, до полного растворения среды. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° C, при давлении 15 фунтов, в течение 15 минут.

При извлечении из автоклава, дайте ему остыть до температуры примерно 45-50 ° С, встряхните смесь до гомогенизации перед подачей на стол. Налейте 20 мл в стерильные чашки Петри.

Дайте пластинам затвердеть, перевернуть и хранить в коробке или завернуть в темную бумагу перед хранением в холодильнике. Очень важно защищать приготовленную среду от прямого света. Рекомендуемая практика состоит в том, чтобы подготовить точное количество, которое будет необходимо.

Если они хранятся в холодильнике, перед использованием они должны быть закалены..

PH среды должен составлять от 7,2 до 7,6, а цвет приготовленной среды - бледно-розовый..

Вариант Агар М-Эндо

Существует еще одна версия эндо-агара (m-Endo), которая следует формуле Маккарти, Делани и Грассо, которая содержит больше соединений и варьируется в способе приготовления..

Этот вариант содержит: лактозу, триптозу, ферментативное расщепление казеина, ферментативное расщепление тканей животных, хлорид натрия, двухосновный фосфат калия, сульфит натрия, дрожжевой экстракт, одноосновный фосфат калия, основной фуксин, дезоксихолат натрия, лаурилсульфат натрия и агара.

В этом случае мы взвешиваем 51 г обезвоженной среды и суспендируем ее в 1 л дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола..

Нагрейте немного, помешивая, пока среда полностью не растворится. Не перегревать и не стерилизовать в автоклаве. Как только смесь станет однородной, подайте ее в стерильных чашках Петри и дайте затвердеть.

использование

В некоторых странах он все еще используется для подсчета общей и фекальной кишечной палочки в пробах воды и пищи, особенно на наличие Кишечная палочка как основной индикатор фекального загрязнения.

Агар M-Endo рекомендован Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для мониторинга и контроля программ дезинфекции и очистки сточных вод, а также для оценки качества питьевой воды..

Наиболее используемый метод - мембранная фильтрация после обогащения образца бульоном с лаурилсульфатом в течение 2-4 часов..

Он также может быть использован в качестве замены агара EMB в микробиологическом анализе пищи и воды методом наиболее вероятного числа (NMP), особенно в полной подтверждающей фазе, чтобы подтвердить наличие Кишечная палочка из мутных бульонов ЕС.

Контроль качества

Для оценки качества приготовленной партии агара Endo высевают известные или сертифицированные контрольные штаммы..

Среди штаммов, которые могут быть использованы для этой цели: Кишечная палочка ATCC 25922, Кишечная палочка ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Шигелла флекснери ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 и Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Штаммы высевают при истощении и инкубируют при 37 ° С в течение 24 часов при аэробиозе..

Ожидаемые результаты:

  • в Escherichia coli: колонии ярко-красные, с металлическим блеском.
  • в E. cloacae и K. pneumoniae колонии должны быть розовыми слизистыми.
  • В случае S. тифимуриум, S. flexneri и P. mirabilis колонии обычно бледно-розовые или бесцветные.
  • в конце концов, E. faecalis ожидается, что он будет частично подавлен, поэтому его рост должен быть слабым с очень маленькими колониями ярко-розового цвета..

ограничения

-Среда Endo обладает низкой селективной силой, поэтому возможно, что некоторые грамположительные микроорганизмы, такие как Staphylococcus, Enterococcus и даже дрожжи, могут расти.

-Другие бактерии, не принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae, могут развиваться в этой среде, как, например, Pseudomonas sp и Aeromonas sp. Характеристиками этих штаммов являются бесцветные неправильные колонии.

-Эта подготовленная среда очень чувствительна к свету, поэтому длительное воздействие этого ухудшает систему индикаторов, необратимо повреждая среду.

-Компоненты среды считаются канцерогенными, поэтому следует избегать прямого контакта.

-Обезвоженная среда очень гигроскопична и должна храниться в своем оригинальном контейнере при комнатной температуре, плотно закрытой и в сухой среде..

ссылки

  1. BD Laboratories Эндо Агар. 2013. Доступно по адресу: bd.com
  2. Неоген Лаборатории М Эндо Агар. Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
  3. "Агар Эндо". Википедия, Свободная энциклопедия. 7 сентября 2017, 08:27 UTC. 28 февраля 2019 года, 22:55. Доступно в: en.wikipedia.
  4. Лаборатория Мерк. Эндо Агар 2019. Доступно по адресу: merckmillipore.com
  5. Технический лист лабораторий. М-Эндо Агар ЛЕС. 2015. Доступно по адресу: liofilchem.net