Agar EMB основа, подготовка и использование



EMB агар представляет собой селективную и дифференцированную твердую культуральную среду, используемую для выделения грамотрицательных бактерий, в основном семейства Enterobacteriaceae, и других нетребовательных грамотрицательных бактерий. Это также известно под аббревиатурой EAM, что означает эозин-метиленовый синий.

Эта среда была создана Холт-Харрисом и Тигом в 1916 году. Она содержит пептон, лактозу, сахарозу, дикалийфосфат, агар, эозин, метиленовый синий и воду. Он очень похож на агар MacConkey, особенно если используется агар EMB, модифицированный Левином, который не содержит сахарозу.

Фактически, каждая лаборатория решает, работает ли она с одним или другим, так как они выполняют одну и ту же функцию, хотя биохимически они разные.

Он даже имеет тот же недостаток, что и классический агар МакКонки, с точки зрения роящей продукции рода Proteus. Поэтому, чтобы избежать этого явления, вы можете увеличить концентрацию агара до 5%.

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Селективный
    • 1.2 Дифференциал
  • 2 Подготовка
  • 3 использования
  • 4 Контроль качества
  • 5 Заключительные соображения
  • 6 Ссылки

фундамент

селективный

EMB-агар является тонко селективным, поскольку содержит анилиновые красители (эозин и метиленовый синий), которые действуют как ингибиторы, предотвращая рост большинства грамположительных бактерий и некоторых требовательных грамотрицательных бактерий..

Однако этот агар имеет недостаток, заключающийся в том, что некоторые грамположительные бактерии могут противостоять присутствию ингибирующих веществ и расти в виде небольших бесцветных точечных колоний, таких как Enterococcus faecalis и некоторые стафилококк.

Вы также можете выращивать определенные дрожжи, такие как Комплекс Candida Albicans, Это даст очень маленькие розовые колонии. Даже хламидоспоры могут быть получены из этих дрожжей, если образец высевают по глубине..

дифференциал

С другой стороны, агар EMB также является дифференциальной средой, поскольку эти красители вместе (эозин и метиленовый синий) обладают способностью образовывать осадок при кислотном pH, поэтому они служат индикаторами его образования..

Следовательно, слабо ферментирующие лактозу или сахарозу бактерии образуют пурпурные колонии в течение 24-48 часов. Например, роды Клебсиелла, Энтеробактер и Серратия.

Те бактерии, которые сильно ферментируют лактозу, такие как Кишечная палочка, или сахароза, как Иерсинии энтероколитические или Proteus Penneri, образуют зеленовато-черный осадок, придающий металлический блеск характерным для этих видов.

Следует отметить, что если используется среда левина EMB (без сахарозы), Иерсинии энтероколитические и Proteus Penneri они будут производить прозрачные колонии.

Бактерии, которые не ферментируют лактозу или сахарозу, питаются наличием пептонов, которые обеспечивают аминокислоты и азот, необходимые для развития бактерий, и дают прозрачные колонии. Например, роды сальмонеллы и шигеллы, среди других.

Также важно отметить, что род Acinetobacter может представлять колонии лавандового синего, хотя он не является ферментером ни лактозы, ни сахарозы, но обладает свойством фиксировать метиленовый синий в клеточной стенке. Это также может произойти с другими окислительными бактериями.

подготовка

Исходная обезвоженная среда светло-бежевого цвета.

Для приготовления этой культуральной среды следует взвесить 36 граммов обезвоженной среды и суспендировать во флаконе, содержащем один литр дистиллированной воды..

После того, как смесь оставлена ​​на 5 минут в состоянии покоя, поднесите фиолу к источнику тепла, интенсивно и постоянно перемешивая до кипения и полного растворения..

Затем растворенную культуральную среду необходимо стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут..

По истечении этого времени он извлекается из автоклава и остается на короткое время для отдыха. Затем он подается даже в горячем (45-50 ° С) от 15 до 20 мл агара в каждую стерильную чашку Петри. Среда должна быть синего лакмуса.

После подачи тарелки оставляют слегка открытыми, пока агар немного не остынет. Затем их накрывают и дают полностью затвердеть. Позже их заказывают в перевернутом держателе бляшек и хранят в холодильнике (8 ° C) до использования..

Эту процедуру предпочтительно выполнять в ламинарном кожухе или перед горелкой Бунзена, чтобы избежать загрязнения..

Важно помнить, что каждый коммерческий дом будет указывать количество, которое необходимо взвесить для приготовления питательной среды..

Конечный pH среды должен составлять 7,2 ± 0,2.

приложений

Эта среда используется для посева мочи и кала или любых других клинических образцов, особенно если подозревается наличие нетребовательных грамотрицательных бацилл, таких как бациллы семейства Enterobacteriaceae, которые очень хорошо растут в этой среде..

Энтеропатогенные бактерии родов Shigella и Salmonella отличаются своими бесцветными или слегка янтарными колониями..

Также растут другие неферментирующие лактозные палочки, такие как Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter и другие..

Кроме того, эта среда очень полезна для микробиологического анализа пищи и воды, поскольку она идеально подходит для полной подтверждающей фазы определения колиформ, то есть для подтверждения наличия Кишечная палочка из мутных бульонов ЕС, из метода наиболее вероятного числа (NMP).

Контроль качества

Чтобы убедиться, что недавно культивированная культуральная среда работает хорошо, можно посадить контрольные штаммы, чтобы наблюдать характеристики колоний и убедиться, что они дают ожидаемые результаты..

Для этого штаммы АТСС или хорошо идентифицированные штаммы Кишечная палочка, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Шигелла флекснери, Pseudomonas aeruginosa и некоторые грамположительные бактерии, такие как S. aureus.

Ожидается, что Кишечная палочка Создают хорошо развитые голубовато-черные колонии с зеленым металлическим блеском. Пока, Enterobacter aerogenes и Klebsiella sp они должны давать хорошо развитые слизистые колонии голубовато-черного цвета.

Со своей стороны, сальмонелла Typhimurium и Шигелла флекснери, они должны образовывать крупные колонии, бесцветные или с небольшим янтарным цветом.

Наконец жанр Pseudomonas aeruginosa он растет как бесцветные колонии неправильного размера, в то время как грамположительные бактерии должны быть полностью подавлены или расти очень маленькими колониями.

Заключительные соображения

Иногда стерилизация вызывает уменьшение метиленового синего, наблюдая оранжевую среду. Для того, чтобы метиленовый синий окислился и пурпурный цвет восстановился, его нужно аккуратно перемешать до восстановления цвета.

Также после стерилизации может выпасть краситель, поэтому его нужно хорошо перемешать перед подачей на чашки Петри.

ссылки

  1. Камачо А., Джайлс М., Ортегон А., Палао М., Серрано Б. и Веласкес О. 2009. Методы микробиологического анализа пищевых продуктов. 2-е изд. Химический факультет, УНАМ. Мексика.
  2. Карранса С., Леон Р., Фалькон Н., Нейман А., Кромм С. Характеристика и распределение штаммов Кишечная палочка Потенциально патогенные изоляты цыплят-бройлеров из птицефабрик в Перу. Преподобное расследование ветеринарный Перу 2012 23 (2): 209-219. Доступно по адресу: scielo.org.
  3. Лаборатории Конда С.А. Эозин Агар и Метиленовый Синий. 2010. Доступно по адресу: condalab.com
  4. Лаборатории Британии. Левин Э.М.Б. (с эозином и метиленовым синим) 2011 г. Доступно по адресу: britanialab.com
  5. BD Laboratories Агар BD EMB (эозин-метиленовый синий агар), модифицированный. 2013. Доступно по адресу: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологическая диагностика Bailey & Scott. 12 изд. Аргентина. Panamericana S.A Редакция