Агар имеет стандартную основу, подготовку и использование

стандартный счет агара представляет собой твердую неселективную культуральную среду, предназначенную для количественного определения аэробной микробной нагрузки, присутствующей в пробах питьевой воды, сточных вод, молочных напитков и других пищевых продуктов. Эта среда также известна как агар PCA, поскольку используется в английском агаре «Plate Count». Он был создан в 1953 году Бухбиндером, Барисом и Гольдштейном.

Стандартная агаризованная среда состоит из дрожжевого экстракта, триптеина, глюкозы, агара и дистиллированной воды. Эта формула содержит основные питательные элементы, которые позволяют развивать нынешнюю аэробную микробную нагрузку, не требуя.

Поскольку среда не содержит ингибиторов, бактерии могут развиваться без каких-либо ограничений, поэтому она идеально подходит для общего подсчета колоний. Однако метод количественного определения чашки не обнаруживает все присутствующие бактерии, а только те, которые способны расти в условиях окружающей среды, которым подвергается стандартный посевной агар..

В этом смысле метод количественного определения пластин направлен на определение общего количества бактерий аэробного мезофильного типа, то есть тех, которые развиваются при температуре от 25 до 40 ° C, с оптимальной температурой роста при 37 ° C..

Эта бактериальная группа очень важна, потому что есть большинство патогенных бактерий для человека.

Следует отметить, что иногда может быть интересно количественно оценить количество психрофильных бактерий, присутствующих в пище. Эти бактерии развиваются при низких температурах (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Аналогичным образом, термофильные бактерии, которые развиваются в диапазоне от 50 ° C до 80 ° C или более, могут быть важны в определенных типах пищевых продуктов, таких как консервы.

Микробная количественная оценка выражается в колониеобразующих единицах (КОЕ) на грамм или миллилитр образца.

индекс

• 1 фундамент
• 2 Подготовка
  • 2.1 Для техники наливать тарелку
  • 2.2 Для поверхностной посадки
• 3 Использование
  • 3.1 Техника разливки тарелок (высевается по глубине)
  • 3.2 Техника высева на поверхность
• 4 Контроль качества
• 5 ограничений
• 6 Ссылки

фундамент

Стандартная среда для подсчета предназначена для удовлетворительного развития нетребовательных аэробных бактерий, поскольку дрожжевой экстракт, трифейн и глюкоза обеспечивают необходимые питательные вещества для хорошего развития микроорганизмов..

С другой стороны, среда имеет чистый цвет и прозрачный внешний вид, поэтому она идеально подходит для демонстрации колоний, разработанных методом глубокого сева (выливания в тарелку)..

Также возможно подсчитать колонии методом высева на поверхность с помощью шпателя Дригальского.

Когда микробная нагрузка высока, десятичные разведения исследуемого образца должны быть сделаны для подсчета КОЕ.

Следует отметить, что эта среда рекомендована Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для подсчета аэробных мезофилов..

подготовка

Взвесьте 23,5 г обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Чтобы полностью растворить смесь необходимо нагревать, часто помешивая, пока она не закипит. Последующие шаги зависят от используемой техники посева.

Для техники наливать тарелку

Распределить путем дозирования от 12 до 15 мл в пробирки. Затем стерилизуют в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут. Разрешить застывать вертикально в виде блока. Хранить в холодильнике до использования.

Растопить кий, когда он будет использоваться. После расплавления держите его на водяной бане при 44-47 ° C, пока готовятся образцы..

Для посадки на поверхность

Стерилизовать среду в автоклаве при 121 ° С, а затем распределить 20 мл в стерильных чашках Петри. Разрешить отвердеть, перевернуть и хранить в холодильнике до использования.

Закалить пластины перед использованием. РН среды должен составлять 7,0 ± 0,2.

использование

Стандартный подсчет агара используется в методе аэробного подсчета мезофилов во время микробиологического анализа воды и пищи. Подсчет аэробных мезофилов необходим, так как он определяет санитарное качество исследуемого образца..

Применение этого метода (с использованием этой среды) позволяет макроскопическую визуализацию изолированных колоний для их количественного определения.

Техника заливки налета (высевается по глубине)

-процесс

Техника состоит из следующего:

1) гомогенизировать образец для перераспределения присутствующих бактерий.

2) Исходную суспензию проводят в стерильном флаконе или пакете, соблюдая соотношение 10 г или 10 мл образца в 90 мл разбавителя (10).^-1).

3) Из исходной суспензии делаются соответствующие десятичные разведения в зависимости от типа образца. Пример: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Разведения делаются с помощью пептонной воды или фосфатного буфера..

Для этого возьмите 1 мл исходной суспензии и поместите в 9 мл разбавителя, продолжайте разведения, если необходимо, принимая сейчас 1 мл разведения.^-2 и так далее.

4) Возьмите 1 мл каждого разведения и поместите в пустые стерильные чашки Петри..

5) Добавьте в каждую чашку от 12 до 15 мл стандартного подсчитанного агара, предварительно растопленного и установленного на 44 - 47 ° C.

6) Дайте плавные вращательные движения на пластины, чтобы равномерно распределить образец на агар и дать затвердеть.

7) Переверните чашки и инкубируйте при 37 ° C в аэробиозе в течение 24-48 часов..

8) Когда время закончится, приступайте к осмотру чашек и подсчитайте количество колоний в разведении, которое позволяет это сделать. Он выбран для подсчета тех пластин, которые имеют от 30 до 300 КОЕ.

Подсчет может быть выполнен вручную или может быть использовано оборудование счетчика колоний..

Допустимые значения на мл образца могут варьироваться от страны к стране в соответствии со стандартами, которыми они руководствуются.

-Расчет UFC

Общий расчет производится по следующей формуле:

Выразите результаты в 1 или 2 цифры, умножая на соответствующую базу 10. Пример: если результат равен 16.545, он округляется на основе третьей цифры до 17.000 и будет выражаться следующим образом: 1,7 х 10⁴. Теперь, если результат был 16 436, округляется до 16 000 и выражается 1,6 х 10⁴.

Техника посажена на поверхность

-процесс

-Инокулировать 0,1 мл прямого образца, если он жидкий, исходная суспензия 10^-1 или последовательных разведений 10^-2, 10^-3 и т. д., в середине стандартного счета агара.

-Распределите образец равномерно с помощью шпателя Дригальски или стеклянной палочки в форме буквы L. Оставьте на 10 минут..

-Переверните чашки и инкубируйте при аэробиозе при 37 ° С в течение 24-48 часов..

-Продолжайте подсчитывать колонии, выбирайте те чашки, которые находятся в диапазоне от 20 до 250 КОЕ.

-Расчет UFC

Для расчета применяется коэффициент разбавления, который является обратным. Число округляется до 2 значащих цифр (округление в соответствии с третьей цифрой) и выражается в степени основания 10. Например, если 224 КОЕ учитываются в пробе без разбавления (10^-1), 22 x 10 сообщается¹  UFC, но если цифра была 225, то сообщалось, что 23 x 10¹ UFC.

Теперь, если вы считаете 199 КОЕ в разведении 10^-3, 20 х 10 будет сообщено⁴ UFC, но если 153 КОЕ учитываются в одном и том же разведении, сообщается 15 x 10⁴ UFC.

Контроль качества

Культуральная среда со стандартным количеством может быть оценена с использованием известных сертифицированных штаммов, таких как: Кишечная палочка ATCC 8739, Золотистый стафилококк ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Стафилококк эпидермидис ATCC 12228, Шигелла флекснери ATCC 12022.

Если культуральная среда находится в оптимальных условиях, удовлетворительный рост ожидается во всех случаях, кроме L. fermentum которые могут иметь регулярное представление.

Чтобы оценить стерильность культуральной среды, одну или две чашки каждой подготовленной партии (не инокулированной) следует инкубировать при 37 ° С в аэробиозе в течение 24 часов. По истечении этого времени рост или изменение цвета среды не должно наблюдаться..

ограничения

-Не растопите агар более одного раза.

-Приготовленная среда может храниться до 3 месяцев, если она хранится в холодильнике и защищена от света..

-Эта среда не подходит для требовательных микроорганизмов и анаэробов.

ссылки

1. Национальное управление лекарственных средств, пищевых и медицинских технологий (ANMAT). Микробиологический анализ продуктов питания, официальная аналитическая методология, индикатор микроорганизмов. Том 3, 2014 год. Доступно по адресу: anmat.gov.ar
2. Дифко Франциско Сория Мелгуизо Лабораториз, С.А. Тарелка графа Агар. 2009. Доступно по адресу: http://f-soria.es
3. Лаборатории Конда Пронадиса. Агар для стандартных методов (PCA) в соответствии с APHA и ISO 4833. Доступно по адресу: condalab.com
4. Лаборатории Британии. В расчете на агар тарелку. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
5. Камачо А., Джайлс М., Ортегон А., Палао М., Серрано Б. и Веласкес О. 2009. Методы микробиологического анализа пищевых продуктов. 2-е изд. Химический факультет, УНАМ. Мексика. Доступно по адресу: depa.fquim.unam