Agar CLED основа, использование и подготовка



CLED агар (Цистин-лактоза-электролиты-дефицит) представляет собой дифференциальную твердую культуральную среду, используемую для диагностики инфекций мочевыводящих путей. Состав питательной среды предназначен для хорошего роста патогенных микроорганизмов в моче и идеально подходит для количественного определения колониеобразующих единиц (КОЕ)..

Культуральная среда CLED является неселективной, поскольку в ней могут расти грамотрицательные, а также грамположительные микроорганизмы. Но это не проблема, так как большинство инфекций мочевыводящих путей вызываются одним типом микроорганизмов..

В случае полимикробной инфекции могут быть получены 2 или 3 разных бактерии, но это очень редко и в большинстве случаев это загрязненные образцы.

Среди грамотрицательных бактерий, которые могут расти в этой среде, есть бактерии, принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae и другие кишечные палочки, уропатогены наиболее часто выделяются в образцах мочи, а именно: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Морганелла Моргания, Pseudomonas aeruginosa, среди других.

Кроме того, среди грамположительных бактерий, которые могут расти в этой среде, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp., Lactobacillus sp. и они могут даже выращивать дрожжи, как комплекс Candida Albicans.

Однако из-за химического состава среды он не позволяет расти некоторым требовательным патогенным микроорганизмам, таким как Neisseria gonorrhoeae, гарднерелла влагалищной, среди других.

индекс

  • 1 Основание агара CLED
  • 2 Основание агара CLED (Бевис)
  • 3 использования
    • 3.1 Посев образцов мочи
    • 3.2 Интерпретация
    • 3.3 Идентификация
  • 4 Подготовка
  • 5 ссылок

Основание агара CLED

Питательная среда CLED имеет в качестве источника энергии мясной экстракт, панкреатический гидролизат казеина и желатиновый гидролизат. Они обеспечивают питательные вещества для развития нетребовательных бактерий.

Он также содержит цистин, аминокислоту, которая обеспечивает рост кишечной палочки, отличающийся небольшим размером.

Аналогично, лактоза содержит сбраживаемый углевод, по этой причине эта среда является дифференцированной; способность отличать ферментирующие бактерии от неферментирующей лактозы.

Ферментирующие бактерии изменяют pH среды путем образования кислот, образуя желтые колонии, в то время как неферментирующие бактерии не вызывают изменений в среде, поэтому они принимают окраску исходного агара зеленого цвета..

Реакция ферментации выявляется благодаря наличию индикатора pH, который в этой среде является бромтимоловым синим.

С другой стороны, низкая концентрация электролита в среде подавляет типичный инвазивный рост рода Протей, называется роящимся эффектом. Это дает преимущество по сравнению с другими средствами, поскольку позволяет подсчитывать UFC, в том числе, если присутствует род Proteus..

Однако низкая концентрация электролитов подавляет рост некоторых видов рода Shigella, будучи этим недостатком по сравнению с другими средствами.

Основа CLED агар (Бевис)

Существует вариант или модификация этой среды, сделанная Бевисом, который включил исходную композицию фуксиновой кислоты (индикатор Андраде) в исходную композицию. Он действует вместе с бромтимоловым синим, чтобы дифференцировать ферментацию от неферментирующих бактерий..

Разница между обычной и модифицированной средой заключается в цвете, принятом в колониях. В случае бактерий, ферментирующих лактозу, колонии приобретают красновато-оранжевый цвет с розовым или красным ореолом, а неферментирующие - голубовато-серые..

приложений

Агар КЛЕД используется исключительно для посева образцов мочи. Использование этой среды особенно часто в европейских лабораториях, в то время как в Америке она используется реже..

Сбор образца должен соответствовать определенным параметрам для получения достоверных результатов, в том числе:

  • Не принимать антибиотики перед взятием пробы.
  • Желательно брать мочу с первого часа утра, поскольку она более концентрированная, когда невозможно взять образцы инвазивными методами..
  • Тщательно вымойте гениталии перед взятием пробы.
  • Откажитесь от первого потока мочеиспускания и затем поместите контейнер.
  • Соберите от 25 до 30 мл мочи в стерильные маркированные контейнеры..
  • Принять немедленно в лабораторию, окруженную льдом.
  • Он должен быть обработан до 2 часов выброса или охлажден при 4 ° C в течение максимум 24 часов.

Посев образцов мочи

Образец мочи должен быть разведен 1:50.

Для разведения поместите 0,5 мл мочи пациента и разбавьте 24,5 мл стерильного физиологического раствора..

Отмерьте 0,1 мл разбавленной мочи и высейте на поверхность с помощью шпателя Дригальски на среде CLED. Это метод высева, указанный для подсчета колоний. Именно поэтому он используется в образцах мочи, так как результаты должны быть выражены в КОЕ / мл..

Для количественного определения полученных колоний выполните следующие действия: подсчитайте количество колоний на чашке и умножьте на 10, а затем на 50. Таким образом, вы получите количество КОЕ / мл мочи..

интерпретация

Подсчет выше 100000 КОЕ / мл -Индика мочевой инфекции

Подсчет ниже 1000 КОЕ / мл - без инфекции

Подсчет от 1000 до 10000 КОЕ / мл - сомнительно, возможно загрязнение, повторный отбор проб.

идентификация

Колонии, выращенные на агаре CLED, должны быть граммовыми, и в зависимости от морфотипических характеристик микроорганизма выполняется определенная субкультура..

Например, если это грамотрицательная бацилла, она будет посеяна на агаре МакКонки, где подтверждается ферментация лактозы или нет. Кроме того, для проведения теста на оксидазу добавляют питательный агар..

В случае, если в грамме обнаружены грамположительные кокки, его можно культивировать в соленом маннитовом агаре и в питательном агаре. В последнем случае проводится тест каталазы. Наконец, если наблюдаются дрожжи, они будут посеяны на агаре Сабуро..

Многие лаборатории отказываются от использования среды CLED и предпочитают использовать только агар крови, макконки и питательный агар для посева образцов мочи..

подготовка

Во флаконе с одним литром дистиллированной воды растворите 36,2 г измельченного агара CLED. После 5 минут отдыха разогрейте ресуспендированный агар, постоянно перемешивая до кипения в течение 1 минуты..

Затем стерилизовать при 121 ° С в течение 15 минут в автоклаве. По истечении этого времени его извлекают из автоклава и дают ему остыть до достижения температуры 45 ° С. Впоследствии подается от 15 до 20 мл в каждой стерильной чашке Петри..

Процедура подачи тарелок должна выполняться внутри колпака с ламинарным потоком или перед горелкой Бунзена, чтобы избежать загрязнения.

Поданные тарелки могут затвердеть, их заказывают в перевернутом держателе для тарелок и хранят в холодильнике (2-8 ° C) до использования..

Конечный рН приготовленной среды должен составлять 7,3 ± 0,2..

ссылки

  1. Рекомендации по микробиологической диагностике инфекции мочевыводящих путей. Чил. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Доступно по адресу: scielo.org.
  2. Панчи Дж. Идентификация микробного агента, вызывающего мочевые инфекции у внутренних пациентов, перенесших катетеризацию мочевого пузыря. 2016. Бакалавриат работает, чтобы подать заявку на звание Licentiate в клинической лаборатории. Технический университет Амбато. Эквадор.
  3. Лаборатории Британии. Половина CLED. Доступно по адресу: britanialab.com.
  4. Ренилаб Лабораториз Инструкция по применению, CLED Агар. 2013 Доступно по адресу: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Основное руководство по микробиологии. Доступно по адресу: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Родригес-Creixems M, Диас MD, Vicente T, Bouza E. Вариант с агаром CLED в рутинной культуре мочи. Проспективная и сравнительная оценка. Диагностический Микробиол Инфект Дис. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. Гарсия П., Паредес Ф., Фернандес дель Баррио М. (1994). Практическая клиническая микробиология. Университет Кадиса, 2-е издание. Издательская служба УЦА.