Цитрусовый агар Симмонс, подготовка и использование



Цитрусовый агар Симмонса Это твердая среда, используемая в качестве биохимического теста для выявления микроорганизмов, особенно грамотрицательных бактерий. Оригинальный носитель был создан Козером в 1923 году..

Цитратная среда Козера состояла из бульона, содержащего фосфат натрия, фосфат аммония, фосфат монокалия, сульфат магния и цитрат натрия..

Как можно видеть, единственным источником углерода в среде является цитрат, а азотом является фосфат аммония, так как белки и углеводы в качестве источника этих элементов не указаны, они обычно присутствуют в других средах..

Следовательно, бактерия, инокулированная в этой среде, может размножаться только в том случае, если она способна взять цитратный углерод. Испытание было положительным, если в среде имелась мутность, однако оно имело недостаток, заключающийся в том, что может возникнуть неспецифическая мутность.

Эту проблему решил Симмонс, добавив агар и бромтимоловый синий в оригинальную формулу Козера. Хотя принцип один и тот же, он интерпретируется по-разному.

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Режим посева
    • 1.2 Интерпретация
  • 2 Подготовка
  • 3 Использование
  • 4 Заключительные соображения
    • 4.1 Инокулят
    • 4.2 Сеялка
    • 4.3 Интенсивность цвета
  • 5 ссылок

фундамент

Некоторые бактерии обладают способностью выживать в отсутствие ферментации или выработки молочной кислоты, что необходимо для получения энергии за счет использования других субстратов. В этом тесте единственным источником углерода является цитрат.

Бактерии, способные выживать в этих условиях, быстро метаболизируют цитрат, используя альтернативу традиционному пути, используя цикл трикарбоновых кислот или цикл ферментации цитрата..

Катаболизм цитрата бактериями включает в себя ферментативный механизм без вмешательства кофермента А. Этот фермент известен как цитриказа (цитрат-оксалоацетат-лиаза) или цитрат-десмолаза. Реакция требует присутствия двухвалентного катиона, который в этом случае обеспечивается магнием.

Реакция генерирует оксалоацетат и пируват, которые затем дают органические кислоты в середине щелочного рН, образующегося при использовании источника азота. Эти органические кислоты используются в качестве источника углерода, образуя карбонаты и бикарбонаты, дополнительно подщелачивая среду.

Режим посева

Цитратную среду Симмонса следует слегка инокулировать в хвост рыбы, используя прямую петлю или иглу, и инкубировать в течение 24 часов при 35-37 ° С. В конце времени результаты наблюдаются.

Посев производится только на поверхность агара. Не делайте прокол.

интерпретация

Если среда имеет исходный цвет (зеленый) и видимого роста нет, тест отрицательный, но если среда меняется на синий, это указывает на наличие щелочных продуктов, что определяется индикатором pH. В этом случае тест положительный.

Это происходит потому, что если бактерия использует углерод цитрата, она также способна поглощать азот фосфата аммония, которым она выделяет аммиак, подщелачивая среду..

С другой стороны, если в среде наблюдается рост бактерий, но нет изменения цвета, тест также следует считать положительным, поскольку при росте это означает, что бактерии смогли использовать цитрат в качестве источника углерода, хотя в данный момент изменения pH не происходит (иногда это может занять).

Если есть сомнения в интерпретации окончательного цвета, его можно сравнить с пробиркой с не привитым цитратом..

подготовка

Взвесьте 24,2 г обезвоженной среды на один литр воды. Смешайте и дайте постоять примерно 5 минут. Завершите растворение среды, нагревая в течение 1 или двух минут, часто помешивая.

Подавать 4 мл в пробирках и автоклавировать при 121 ° С в течение 15 минут. Покидая автоклав, наклоните его с помощью опоры таким образом, чтобы агар затвердевал в виде пика флейты с небольшим выступом или дном и большим скосом.

Конечный pH цитратной среды составляет 6,9 (зеленый). Эта среда очень чувствительна к изменению pH.

При рН 6 или ниже среда становится желтой. Этот цвет не наблюдается в тесте с бактериями.

И при pH 7,6 или выше среда меняется на интенсивный прусский синий.

использование

Цитратный агар Симмонса используется для идентификации некоторых микроорганизмов, особенно бацилл, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae, и других бактерий, не ферментирующих глюкозу..

Заключительные соображения

Цитратная среда Симмонса - очень деликатный тест, потому что ложные срабатывания могут быть получены при наличии определенных ошибок.

Необходимо соблюдать следующие меры предосторожности:

прививочный материал

Не делайте очень толстый или нагруженный бактериальный инокулят, потому что он может вызвать появление медно-желтого цвета на участке посадки, не затрагивая остальную среду, но это может привести к убеждению, что есть рост. То же самое не означает позитивность теста.

Аналогичным образом, толстый инокулят может давать ложноположительный результат, поскольку предварительно образованные органические соединения в клеточных стенках умирающих бактерий могут выделять достаточно углерода и азота, чтобы повернуть индикатор pH.

Поэтому идеальным является посадка с использованием иглы вместо платиновой рукоятки, чтобы избежать взятия лишнего материала..

посаженный

С другой стороны, когда подбирается батарея биохимических тестов для идентификации рассматриваемого микроорганизма, важно, чтобы цитратный тест был первым, чтобы его инокулировали, чтобы избежать перетаскивания белков или углеводов из другой среды..

При этом обстоятельстве возможно получить ложноположительный результат, потому что любое из этих веществ, которые введены по ошибке, будет метаболизироваться и вызывать изменение pH.

Другой способ избежать перетаскивания веществ - это хорошо сжечь ручку и сделать новый посев между одним испытанием и другим..

Следует также соблюдать осторожность при прикосновении к колонии для выполнения инокулята, поскольку следует избегать вытаскивания части агара из культуры, из которой происходят бактерии, из-за ранее объясненного.

В этом смысле Мацен, Шеррис и Брэнсон рекомендуют разводить инокулят в физиологическом растворе перед инокуляцией цитратного теста, чтобы избежать переноса других источников углерода..

Интенсивность цвета

Следует принять во внимание, что интенсивность цвета, получаемого при положительном результате теста, может варьироваться в зависимости от коммерческого дома.

Кроме того, есть микроорганизмы, которые дают положительный результат через 24 часа, но есть и другие штаммы, которым требуется 48 или более часов для изменения рН.

ссылки

  1. Mac Faddin J. (2003). Биохимические тесты для выявления бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос-Айрес Аргентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. 5-е изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  4. BD Laboratories BBL Симмонс Цитрат Агар Сланц. 2015. Доступно по адресу: bd.com
  5. Лаборатории Британии. Цитратный агар Симмонса. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  6. Valtek Диагностические Лаборатории. Цитратный агар Симмонса. 2016. Доступно по адресу: andinamedica.com.