Агаровая шоколадная основа, применение и подготовка



шоколадный агар это твердая, обогащенная, неизбирательная и недифференцированная культуральная среда. Он используется в основном для выделения микроорганизмов, требующих с точки зрения питания, хотя он может выращивать бактерии любого типа..

Вот почему его полезность увеличивается, особенно при посеве образцов, которые обычно стерильны, таких как CSF и суставная жидкость. Хотя он также входит в число средств, выбранных для посева полимикробных образцов, но в этих случаях необходимо добавлять антибиотики, которые подавляют сопутствующую флору.

Эта среда имеет характерный коричневый цвет, очень похожий на шоколад, отсюда и его название. Препарат очень похож на кровяной агар, только в этом случае кровь должна быть нагрета, чтобы эритроциты разрушались.

Его препарат, как кровяной агар, очень деликатный, так как он легко загрязняется. По этой причине многие лаборатории предпочитают приобретать эту среду, уже приготовленную коммерческими предприятиями, что гарантирует их качество..

индекс

  • 1 фундамент
  • 2 использования
    • 2.1 Шоколадный агар с колумбийским агаром
    • 2.2 Шоколадный агар, приготовленный с базовым агаром ГХ (для гонококков)
    • 2.3 Шоколадный агар, приготовленный с агаром Мюллера Хинтона
    • 2.4 Шоколадный агар, приготовленный с агаром Thayer Martin
  • 3 Подготовка
    • 3.1 Расчеты
    • 3.2 Взвешивать и растворять
    • 3.3 Стерилизовать
    • 3.4 Агрегация крови
    • 3.5 Еще один способ приготовления шоколадного агара без использования крови
  • 4 Контроль качества
  • 5 ссылок

фундамент

Эта среда состоит из основы агара, богатой питательными веществами и подогретой кровью. Гемолиз эритроцитов обеспечивает фактор X (гемин) и фактор V (NAD), которые необходимы для роста некоторых микроорганизмов, таких как род. Haemophilus. Это также очень полезно для изоляции Neisserias sp.

Как и кровяной агар, в зависимости от необходимости в качестве базового агара можно использовать разные среды. К числу используемых сред относятся инфузия мозга и соевый агар с триптиказой, хотя наиболее рекомендуемыми являются агар Columbia, агар Müeller Hinton, агар GC и агар Thayer Martin..

Некоторые варианты шоколадного агара включают коммерчески доступную обогащенную добавку под названием Isovitalex или Polivitex..

Эти добавки содержат витамин В12, L-глютамин, аденин, гидрохлорид гуанина, п-аминобензойная кислота, никотинамидадениндинуклеотид (NAD), тиаминпирофосфат, нитрат трехвалентного железа, гидрохлорид тиамина, гидрохлорид цистеина, L-цистин и глюкоза.

Важно отметить, что шоколадный агар более обогащен, чем кровяной агар, но не позволяет наблюдать закономерности гемолиза..

приложений

Шоколадный агар с колумбийским агаром

Эта среда содержит казеин и расщепленный поджелудочной железой сердца, расщепленный мясной пептид, хлорид натрия, агар, дрожжевой экстракт и кукурузный крахмал. Он также богат витаминами, минералами и незаменимыми аминокислотами.

Эта база с подогретой кровью идеально подходит для выделения бактерий рода Neisseria. С другой стороны, если в среду добавлена ​​добавка для бруцелл, вышеупомянутый микроорганизм может быть выделен. Результаты улучшаются с помощью конской крови.

Шоколадный агар с базовым агаром GC (для гонококков)

Эта среда содержит пептоны, кукурузный крахмал, одноосновные и двухосновные буферы, хлорид натрия и агар..

Большинство коммерчески готовых презентаций шоколадного агара идут с этой основой и не содержат нагретой крови, а содержат синтетическую смесь гемина и химической добавки факторов роста, витаминов, минералов, аминокислот, фактора V и глюкозы..

Шоколадный агар с агаром Мюллера Хинтон

Он используется для проведения теста на чувствительность к противомикробным препаратам требовательных микроорганизмов, таких как Streptococcus pneumoniae используя 5% нагретой бараньей крови.

Он также служит для первичной изоляции Neisserias и Haemophilus, но в частном случае изоляции Haemophilus использование конской крови является предпочтительным, так как она является богатым источником факторов X и V.

С другой стороны, если образец для посева поступает из нестерильной зоны, рекомендуется добавление антибиотиков для подавления нормальной флоры этой зоны..

Пример для респираторных образцов, где подозревается присутствие бактерий рода Haemophilus Бацитрацин используется для подавления роста Стафилококк, микрококк, стрептококк и сапрофитная нейссерия.

В случае образцов генитального шанкра, где это подозревается Haemophilus ducreyi, Успешно использовался шоколадный агар, приготовленный следующим образом: агар Мюллера-Хинтона с 5% шоколадной крови лошадей, 1% обогащенной изовиталексом и 3 мкг / мл ванкомицина.

Шоколадный агар, приготовленный с агаром Thayer Martin

Эта среда специально для изоляции Neisseria gonorrhoeae. Он должен содержать антибиотики для подавления сопровождающей флоры. Кровь ягненка используется.

подготовка

Показания для приготовления базового агара для использования должны быть видны. Они находятся на обратной стороне пакета с обезвоженной средой. Они обычно описывают, сколько нужно взвесить, чтобы приготовить один литр культуральной среды..

В лаборатории вы можете приготовить необходимое количество, оно может быть больше или меньше одного литра..

вычисления

Правило трех сделано, чтобы рассчитать, сколько нужно взвесить, чтобы подготовить желаемый объем. пример:

Если на 1 литр необходимо взвесить 40 гр, а лаборатории требуется 800 мл, то сказано:

1000 мл -40 гр

800 мл - Х

Формула будет выглядеть следующим образом:

Х = 32 гр (весит 800 мл).

Взвесьте и растворите

Продолжаем взвешивать необходимое количество и помещаем его в фиолу с водой.

Нагреть до умеренной температуры и осторожно перемешать вращательными движениями до полного растворения обезвоженной среды, оставляя кипеть на 1 минуту..

стерилизовать

Фиолу вводят в автоклав для стерилизации среды при 121 ° С в течение 20 минут..

Агрегат крови

При выходе из автоклава его оставляют отдыхать до тех пор, пока температура среды не станет приблизительно между 56 и 70 ° C, чтобы поместить кровь и перемешивать, пока среда не станет коричневой..

Если вы собираетесь добавлять добавки, самое время это сделать. Затем смешайте и подайте 20 мл в каждую стерильную чашку Петри..

Вся процедура должна выполняться в вытяжном шкафу с ламинарным потоком или вокруг горелки Бунзена..

Дайте постоять, пока они не затвердеют и не перевернутся в холодильнике..

Еще один способ приготовления шоколадного агара без использования крови

Основную среду готовят, как описано выше, коммерчески полученный дегидратированный гемоглобин растворяют и стерилизуют в автоклаве..

Оба раствора оставляют охлаждаться до 50 ° C, присоединяют и добавляют добавку. Смешать в асептических условиях и затем подавать в стерильных чашках Петри..

Контроль качества

Важно, чтобы кровь помещалась при указанной температуре, потому что это идеальный способ лизировать эритроциты и в то же время поддерживать фактор V, который является термочувствительным.

На поверхности агара не должно быть пузырьков. Каждую партию из 100 чашек следует инкубировать по одной или двум чашкам в печи при 37 ° С в течение 24 часов для проверки ее стерильности..

Для достижения наилучших результатов шоколадный агар следует использовать вскоре после приготовления.

Контрольные штаммы бактерий должны быть взяты в лаборатории для оценки эффективности свежеприготовленной среды для роста основных требовательных микроорганизмов, имеющих клиническое значение..

ссылки

  1. Гарсия П., Паредес Ф., Фернандес дель Баррио М. (1994). Практическая клиническая микробиология. Университет Кадиса, 2-е издание. Издательская служба УЦА.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Аргентина. Panamericana S.A Редакция.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana S.A..
  4. Льянес Р., Рейес А., Родригес С., Гусман Д., Ллоп А. Возможность использования базовой культуральной среды GC-Biocen Agar в лаборатории микробиологии. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Доступно по адресу: scielo.sld.
  5. Участники Википедии. Шоколадный агар. Википедия, Свободная энциклопедия. 17 декабря 2018 года, 19:54 UTC. Доступно по адресу: en.wikipedia.org.