Агар BHI фонд, подготовка и использование

BHI агар или инфузионный агар мозга - питательная твердая культуральная среда. На испанском мы называем его агаром для инфузии мозга. Это неселективная культуральная среда, что означает, что могут развиваться все виды грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторые дрожжи и нитчатые грибы..

Она состоит из мозга и сердце инфузионной говядины, пептического гидролизат тканей животных, поджелудочная гидролизата казеина, хлорид натрия, глюкозы, гидрофосфата и агара.

Следует отметить, что BHI агар один из культуральной среды наиболее частого использования в бактериологических лабораториях. Он может быть использован без добавок в качестве первичной культуры, пересевают колонии, полученные в других селективных средах или для поддержания штаммов в лаборатории.

С другой стороны, это идеальная среда для использования в качестве основы при приготовлении обогащенных сред, таких как кровяной агар и шоколадный агар. Оба идеально подходят для изоляции требовательных микроорганизмов с точки зрения питания. Тем не менее, необходимо учитывать, что, поскольку он содержит глюкозу, он не позволяет наблюдать закономерности гемолиза..

Аналогично, агар BHI может быть использован для приготовления специальных средств для выделения патогенных микроорганизмов с трудным ростом в обычных средах, среди которых: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae и Histoplasma capsulatum.

С добавкой антибиотика агар BHI становится селективной средой для выделения грибов.

индекс

• 1 фундамент
• 2 Подготовка
  • 2.1 Клинья
  • 2.2 Пластины
  • 2.3 Приготовление кровяного агара
• 3 использования
  • 3.1 Использование без добавок
  • 3.2 В качестве базового агара для приготовления других сред
• 4 Контроль качества
• 5 ссылок

фундамент

Это питательная культуральная среда для выделения умеренно требовательных микроорганизмов, способная увеличить ее обогащение за счет добавления крови и других пищевых добавок..

Это неселективная культуральная среда, поэтому она обеспечивает рост большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторых грибов. Тем не менее, он может стать селективным с добавлением антибиотиков.

Среда содержит настой мозга и сердца теленка, пептидный гидролизат из тканей животных и казеиновый панкреатический гидролизат; Все эти соединения действуют как источники витаминов, аминокислот, азота и углерода..

Глюкоза - это углевод, который дает энергию микроорганизмам после их ферментации. Принимая во внимание, что хлорид натрия и динатрийфосфат поддерживают осмотическое равновесие и обеспечивают pH, близкий к нейтральному. Наконец, агар дает твердую консистенцию для среды.

подготовка

Взвесьте 52 грамма обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Доведите смесь до источника тепла, пока она не закипит, часто помешивая в процессе растворения..

Вы можете приготовить дольки или тарелки с агаром BHI без добавок..

упоры

Для приготовления клиньев подают препарат до заполнения половины каждой пробирки, накрывают крышкой и стерилизуют в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут, когда выходят на пол, пока они не затвердеют. Затем хранить в холодильнике до использования.

тарелки

Растворенную смесь автоклавировали при 121 ° С в течение 15 минут, когда она оставлялась, ей давали остыть до 50 ° С и 20 мл среды подают в стерильные чашки Петри. Им разрешается затвердевать, переворачивать и хранить в холодильнике до использования. Разрешить пластины принять комнатную температуру перед посадкой.

PH среды должен составлять 7,4 ± 0,2.

Неподготовленная среда бежевого цвета, приготовленная из светлого янтаря.

Приготовление кровяного агара

После стерилизации среды охладите до температуры примерно 45-50 ° С, в это время добавьте кровь (50 мл), осторожно перемешайте до гомогенизации и асептически подавайте 20 мл в каждую чашку Петри. Если на плите образуются пузырьки, пламя горелки должно быстро проходить над пузырьками, чтобы устранить их..

Аналогичным образом, специальные среды могут быть приготовлены путем добавления соответствующих добавок, когда смесь достигает температуры от 45 до 50 ° C..

Среда вишнево-красная.

приложений

Использовать без добавок

Агар BHI без добавок полезен в качестве первичной культуры и для посадки чистых штаммов микроорганизмов, которые требуют средней или умеренной потребности для последующей идентификации.

Поскольку это светлая среда, она идеально подходит для наблюдения за пигментами, а также потому, что она не содержит мешающих веществ, ее можно использовать для проведения биохимических испытаний, таких как оксидаза и каталаза, или для проведения других биохимических испытаний из колоний, происходящих из этого агар.

Аналогично, агаровые дольки BHI широко используются для поддержания штаммов в течение определенного времени в лаборатории (bacterioteca)..

Планшеты или клинья, посаженные на поверхность бактериальными штаммами, инкубируют при 37 ° С в течение 24-48 часов. В то время как у грибов температура и время инкубации будут зависеть от типа грибка, который ищут.

В качестве базового агара для приготовления других сред

С помощью этой базы могут быть приготовлены обогащенные и селективные носители.

обогащенный

Его основная функция - служить основой для приготовления кровяного агара для рутинного использования в микробиологических лабораториях. В частности, основание BHI способствует выделению штаммов Streptococcus sp. Однако он имеет недостаток, заключающийся в том, что он не подходит для наблюдения за режимами гемолиза, поскольку содержит глюкозу..

Он также используется при приготовлении агара крови кролика или лошади для выделения Haemophilus sp. Для достижения лучших результатов вы можете добавить обогащение дополнения (IsoVitaleX).

Если образцы попадают из дыхательных путей в агар, можно добавить бацитрацин для подавления сопровождающей флоры и увеличения вероятности восстановления штаммов Haemophilus sp.

С другой стороны, кровяной агар (ягненок или человек) может быть приготовлен с теллуритом цистином для выделения Corynebacterium diphtheriae. Также полезно приготовить агар с кроличьей кровью с добавлением цистина и глюкозы для выделения Francisella tularensis.

Посев на чашки с кровяным агаром проводят путем истощения и выдерживают при 35-37 ° С в течение 24-48 часов в микроаэрофильной среде (5-10% СО).₂).

селективный

Эта среда с добавлением антибиотиков может заменить сабуро-агар для выделения грибов.

Комбинация агара BHI с хлорамфениколом - гентамицином или пенициллином -, стрептомицином и лошадиной кровью идеально подходит для выделения Histoplasma capsulatum.

В зависимости от микроорганизма, подлежащего выделению, рекомендуется инкубировать при 35-37 ° C или при комнатной температуре при аэробиозе. Иногда необходима инкубация в обоих температурных диапазонах, используя для этого 2 чашки.

Некоторые грибы, такие как Трихофитон ментагрофиты они должны быть инкубированы при комнатной температуре до 7 дней.

Контроль качества

Из каждой подготовленной партии рекомендуется инкубировать 1 чашку или клин при 37 ° С в течение 24 часов и убедиться в отсутствии роста; Особенно важно при приготовлении кровяного агара, потому что это легко загрязненная среда.

С другой стороны, качество среды может быть оценено путем инокуляции известных или сертифицированных стандартных штаммов и наблюдения за их развитием..

В этом смысле для оценки агара BHI без добавок, штаммов Кишечная палочка ATCC 25922, Золотистый стафилококк ATCC 25923 или Candida Albicans АТСС 10231. Их инкубируют при 37 ° С в аэробиозе в течение 24-48 часов. Во всех случаях ожидается удовлетворительный рост.

Для оценки кровяных агаровых пластин, штаммов  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 или Трихофитон ментагрофиты ATCC 9533.

Штаммы бактерий инкубируют при 37 ° С в микроаэрофилике в течение 24 часов, тогда как гриб инкубируют при комнатной температуре во влажной камере до 7 дней. Во всех случаях ожидается удовлетворительный рост.

ссылки

1. Лаборатории Британии. Мозг Сердце настой Агар. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com.
2. BD Laboratories Мозг сердца инфузии (BHI) агар. 2013. Доступно по адресу: bd.com.
3. Дифко Франциско Сория Мелгуизо Лабораториз, С.А. Мозговой сердечный инфузионный агар. 2009.
4. Неоген лаборатория. Мозговой сердечный инфузионный агар. Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
5. Гиль М. Агар кровь: основа, применение и подготовка. 2018. Доступно по адресу: lifeder.com.
6. Участники Википедии. Инфузия мозга Википедия, Свободная энциклопедия. 19 сентября 2018 года, 03:58 UTC. Доступно по адресу: wikipedia.org. Доступ 2 марта 2019 г..
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.