Baird Parker Agar, подготовка и использование

Бэйрд Паркер Агар это твердая, селективная и дифференцированная культуральная среда. Он был создан в 1962 году для обнаружения и коагулазо-положительного подсчета стафилококка (Золотистый стафилококк).

Он состоит из панкреатического гидролизата казеина, мясного экстракта, дрожжевого экстракта, хлорида лития, глицина, пирувата натрия, теллурита калия, агара и эмульсии яичного желтка.

Агар Бэйрд Паркер основан на способности S. aureus восстановления теллурита и продуцирования лецитиназы. Оба свойства создают колонию с конкретными характеристиками для этого вида. Следовательно, он предлагает большую эффективность в обнаружении этого микроорганизма.

Типичные колонии S. aureus они черные или темно-серые, с бесцветной каймой и прозрачным ореолом, который их окружает, дифференцируя себя от остальных микроорганизмов. Этот патоген может быть найден в клинических образцах, воде, косметике и сырой или приготовленной пище.

Его диагностика или обнаружение очень важны из-за разнообразных патологий, таких как пищевое отравление, синдром ошпаренной кожи, синдром токсического шока, абсцессы, менингит, сепсис, эндокардит и другие..

индекс

• 1 фундамент
  • 1.1 Пищевая ценность
  • 1.2 Селективный
  • 1.3 Дифференциал
• 2 Подготовка
  • 2.1 Эмульсия яичного желтка
  • 2.2 Теллурит калия в 1% мас. / Об.
  • 2.3 Приготовление питательной среды
• 3 Использование
  • 3.1 Клинические образцы
  • 3.2 Образцы пищи
  • 3.3 Образцы воды
• 4 Контроль качества
• 5 рекомендаций
• 6 Ссылки

фундамент

Питательная сила

Казеиновый панкреатический гидролизат, мясной экстракт и дрожжевой экстракт являются источниками питательных веществ, витаминов и минералов, необходимых для общего развития микроорганизмов, в то время как пируват и глицин являются соединениями, которые способствуют специфическому росту Золотистый стафилококк.

селективный

Агар Байрд Паркер является селективным, потому что он содержит вещества, которые подавляют рост сопровождающей флоры, одновременно способствуя развитию S. aureus. Ингибирующими соединениями являются хлорид лития и теллурит калия..

дифференциал

Это средство позволяет дифференцировать S. aureus остальной части коагулазонегативных стафилококков. S. aureus обладает способностью восстанавливать теллурит до черного металлического свободного теллура, образуя черные или темно-серые колонии.

Аналогичным образом, яичный желток обеспечивает субстраты для доказательства присутствия фермента лецитиназы и липазы. S. aureus это положительная лецитиназа, и поэтому вокруг колонии будет наблюдаться чистый ореол, что указывает на то, что лецитин был гидролизован.

В этом смысле появление в этом агаре черных или темно-серых колоний, ярких с легким ореолом вокруг, указывает на присутствие S. aureus. 

Если образовалась зона осаждения, это свидетельствует о наличии липазной активности. Некоторые штаммы S. aureus они положительные липазы и другие отрицательные.

В случае, если S. aureus Если липаза положительная, вокруг черной или темно-серой колонии будет наблюдаться непрозрачная зона, а затем прозрачный ореол из-за действия лецитиназы..

Колонии бактерий, кроме S. aureus способный расти в этой среде, будет развиваться бесцветные или коричневые колонии, без ореола вокруг.

Также можно наблюдать атипичные черные колонии с бесцветной границей или без нее, но без четкого ореола. Эти колонии не должны приниматься во внимание, они не соответствуют S. aureus.

подготовка

Эмульсия яичного желтка

Возьмите свежее куриное яйцо, хорошо вымойте его и поместите на 2-3 часа в 70% спирт. Затем яйцо открывается в асептических условиях, и яичный белок тщательно отделяется от желтка. После этого отбирают 50 мл желтка и смешивают с 50 мл стерильного физиологического раствора..

Теллурит калия в 1% мас. / Об.

Некоторые коммерческие дома продают 1% готового к употреблению теллурита калия. Добавляется в среду до затвердевания среды.

Для приготовления этого раствора в лаборатории взвесить 1,0 г теллурита калия и растворить в части воды. Впоследствии количество воды доводится до 100 мл. Раствор должен быть стерилизован методом фильтрации.

Подготовка питательной среды

Взвесить 60 г обезвоженной среды и растворить в 940 мл дистиллированной воды. Оставьте смесь в покое примерно на 5-10 минут..

Применить тепло, часто перемешивая среду, чтобы улучшить процесс растворения. Пусть кипятят минуту. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут.

Дайте постоять, пока он не достигнет температуры 45 ° C, и добавьте 50 мл эмульсии яичного желтка и 10 мл 1% теллурита. Хорошо перемешать и подавать от 15 до 20 мл на стерильные чашки Петри.

Дайте застыть, закажите перевернутые в таблички и храните в холодильнике до использования.

Конечный pH приготовленной среды должен составлять 6,8 ± 0,2..

Перед посадкой образца подождите, пока пластина не изменит температуру окружающей среды. Сеять пластинки полосатым или высевом на поверхность шпателем Дригальски.

Цвет обезвоженной среды - светло-рыжий, а цвет приготовленной среды - светло-янтарный..

использование

Клинические образцы

Клинические образцы высеваются непосредственно путем разгрузки части материала на одном конце пластины, и оттуда он истощается. Инкубировать от 24 до 48 часов при 35-37 ° C.

Образцы пищи

Взвешивают 10 г образца пищи и гомогенизируют в 90 мл 0,1% пептонированной воды, при необходимости готовят разведения. Инокулируйте чашки в трех экземплярах 0,3 мл приготовленных растворов и высевайте на поверхность шпателем Дригальского. Инкубировать от 24 до 48 часов при 35-37 ° C.

Эта методология позволяет подсчитать типичные полученные колонии и является идеальной при наличии S. aureus выше 10 КОЕ на г / мл образца.

Если вы подозреваете, что сумма S. aureus он небольшой или сопровождается большой флорой, предлагается обогащать образец в триптиказном соевом бульоне 10% NaCl и 1% пируватом натрия. Это будет способствовать росту S. aureus и будет препятствовать развитию сопутствующей флоры. Облачные тубы будут посеяны на агаре Байрд Паркер.

Пробы воды

В вакуумной системе фильтрации и стерилизации фильтруется 100 мл воды, а затем микропористая мембрана 0,4 мкм удаляется стерильным зажимом и помещается на пластину Байрда Паркера. Инкубировать в течение 24-48 часов при 35-37 ° С. Этот метод позволяет считать типичные колонии S. aureus.

Контроль качества

Для оценки качества агара Байрда Паркера можно использовать известные штаммы, такие как Золотистый стафилококк ATCC 25923, Золотистый стафилококк ATCC 6538, Стафилококк эпидермидис ATCC 12228, Кишечная палочка ATCC 25922 или Proteus mirabilis ATCC 43071.

В случае штаммов S. aureus ATCC, как известно, уменьшает теллурит, и они являются положительными липазой и лецитиназой. Поэтому должно происходить удовлетворительное развитие и расти выпуклые колонии с черным центром и бесцветным краем, с непрозрачным ореолом и другим ореолом, более внешним, прозрачным.

С другой стороны, S. epidermidis в этой среде ожидается слабое развитие, с колониями от серовато-коричневого до черного, четкого ореола нет.

в Кишечная палочка и P. mirabilis ожидается, что он будет полностью или частично подавлен. В случае роста коричневые колонии будут развиваться без непрозрачной зоны или четкого ореола.

рекомендации

-Среду не следует нагревать после добавления теллурита и желтка.

-Приготовление эмульсии яичного желтка и добавление ее в среду является очень уязвимой стадией загрязнения. Крайняя осторожность должна быть принята.

-Если есть присутствие типичных колоний S. aureus должно быть подтверждено установкой коагулазного теста на указанное напряжение.

-Если с коагулазой имеются сомнительные результаты, необходимо провести другие подтверждающие тесты.

-Будьте осторожны, чтобы не перепутать наличие типичных колоний S. aureus с нетипичными колониями черного цвета.

ссылки

1. Участники Википедии. Бэйрд-Паркер Агар. Википедия, Свободная энциклопедия. 15 марта 2017 года, 19:36 UTC. Доступно по адресу: wikipedia.org/ По состоянию на 18 февраля 2019 г..
2. BD Laboratories. Бэйрд Паркер Агар. 2006. Доступно по адресу: bd.com
3. Лаборатории Британии. Бэйрд Паркер, агаровая база. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
4. Франциско Сория Мелгуизо Лаборатории. 2009. Бэйрд Паркер Агар. Доступно по адресу: http://f-soria.es/Inform
5. Лаборатории Британии. Калий теллурит. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
6. Аларкон-Лавин М, Оярцо С, Эскудеро С, Серда-Лил Ф, Валенсуэла Ф. Перевозка Золотистый стафилококк энтеротоксигенный тип А, в мазках из носоглотки у обработчиков пищи. Преподобный Мед Чили 2017; 145: 1559-1564
7. Венесуэльский Стандарт Ковенен 1292-89. (1989). Продукты питания. Изоляция и подсчет Золотистый стафилококк. Доступно в:sencamer.gob.ve