Фогес-Проскауэр тестирование основы, подготовка и использование



Тест Фогеса-Проскауэра является биохимическим тестом, который используется для выявления бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae. Особенно полезно дифференцировать штаммы Кишечная палочка из Клебсиелла и энтеробактер, среди других.

Тест проводится в жидкой культуральной среде, называемой метил красный-Фогес Проскауэр, более известной под аббревиатурой RM / VP. Эта среда состоит из забуференного полипептона, глюкозы, дикалийфосфата и дистиллированной воды..

Текущая среда RM / VP является модификацией среды Кларка и Лубса, которая изначально содержала более низкие концентрации пептонов и глюкозы. Следовательно, было получено меньше иона водорода, необходимого для положительной реакции Фогеса-Проскауэра..

Тест основан на способности микроорганизма использовать глюкозу по пути бутиленгликоля и образовывать нейтральный конечный продукт, называемый ацетоин, в присутствии кислорода и щелочного pH..

В среде RM / VP, помимо возможности выявления теста Фогеса-Проскауэра, также может быть выявлен тест на метиловый красный.

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Основа теста Фогеса-Проскауэра
    • 1.2 Основа для разработки теста и интерпретации
  • 2 Подготовка
    • 2.1 Средний RM / VP
    • 2.2 Фогес А Реагент
    • 2.3 Реагент Фогес В
  • 3 Процедура теста Фогеса-Проскауэра
    • 3.1 Разработка теста
  • 4 Использование
  • 5 Контроль качества
  • 6 Ссылки

фундамент

Основа теста Фогеса-Проскауэра

Pluripeptonas, присутствующие в среде, обеспечивают пищевые потребности, необходимые для роста бактерий. Со своей стороны, глюкоза является основным соединением. Многие бактерии обладают способностью метаболизировать глюкозу и образовывать пировиноградную кислоту.

Пировиноградная кислота является средней точкой в ​​метаболизме глюкозы, и оттуда каждый микроорганизм может идти разными путями. Некоторые из них образуют смешанные кислоты, такие как молочная кислота, уксусная кислота, муравьиная кислота и янтарная кислота, а другие образуют нейтральные продукты, такие как 2,3-бутандиол.

Тест Фогеса-Проскауэра показывает способность микроорганизма образовывать ацетилметилкарбинол (ацетоин), промежуточный продукт 2,3-бутандиола в аэробных условиях..

Ацетоин восстанавливается и образует 2,3-бутандиол, но эта реакция обратима, поэтому, если 2,3-бутандиол окисляется, образуется ацетоин. Поэтому кислород необходим.

Дикалийфосфат является буфером, который увлажняет смесь при pH 6,9 ± 0,2..

Основа для разработки теста и интерпретации

Чтобы продемонстрировать реакцию, необходимо провести разработку с использованием двух реагентов (реагентов Баррита), известных как Voges A и Voges B.

Voges A представляет собой 5% -ный раствор α-нафтола, а Voges B представляет собой 40% -ный раствор гидроксида калия. Если гидроксид калия недоступен, его можно заменить на 40% гидроксид натрия.

Nap-нафтол является катализатором, который увеличивает интенсивность цвета реакции, что делает тест более чувствительным. Α-Нафтол всегда должен добавляться первым, перемешивая пробирку, чтобы среда вступала в контакт с кислородом. Таким образом, присутствующий ацетоин окисляется до диацетила, а 2,3-бутандиол окисляется с образованием ацетоина, передавая его диацетилу..

Вот как α-нафтол будет связываться с диацетилом, который, в свою очередь, связан с ядром гуанидина, присутствующим в аминокислоте аргинин, причем последняя происходит из плюрипептон.

Со своей стороны, калия или натрия гидроксид отвечает за поглощение СО2 и реагировать с пептонами. Эта реакция вызывает образование розово-лососевого цвета, хорошо видимого после очень хорошего встряхивания трубки.

Чтобы окрашивание происходило мгновенно, необходимо смешать правильные количества диацетила, пептона и α-нафтола. Если этого не происходит, дайте трубке отдохнуть в течение 15 минут перед интерпретацией.

Обычно тест положительный через 2–5 минут, когда наблюдается слабый розовый цвет. Если оставить в покое от 30 минут до 1 часа, интенсивность цвета будет максимальной (темно-красный).

Отрицательный тест будет очевиден, когда бульон желтый. Через 1 час, если тест отрицательный, в результате реакции гидроксида калия с α-нафтолом может образоваться медный цвет..

подготовка

Средний RM / VP

Взвесьте 17 г обезвоженной культуральной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Дайте постоять 5 минут. Нагреть до кипения, чтобы полностью раствориться. Подавать от 3 до 4 мл в пробирках и стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут..

Обезвоженная культуральная среда бежевого цвета, а приготовленная среда светло-янтарного цвета..

Конечный pH среды составляет 6,9 ± 0,2..

Фогес А Реагент

Взвесить 5 г α-нафтола и растворить в 50 мл этилового спирта (абсолютного). Впоследствии продолжайте добавлять этиловый спирт до 100 мл..

Реагент Фогес B

Взвесить 40 г гидроксида калия и растворить в 50 мл дистиллированной воды в стакане. Стакан следует поместить в баню с холодной водой для контроля температуры, потому что во время растворения препарат резко поднимается.

После того, как раствор остыл, его переносят в градуированный баллон и доводят до 100 мл дистиллированной водой..

Процедура теста Фогеса-Проскауэра

Для проведения теста Фогеса-Проскауэра бульон RM / VP инокулируют исследуемым микроорганизмом из чистой культуры от 18 до 24 часов..

Инокулят не должен быть слишком плотным. Его инкубируют при 35-37 ° С в течение 24-48 часов, хотя иногда инкубация необходима в течение нескольких дней. Коуэн и Стил считают, что 5 дней - это минимальное время инкубации, необходимое для выявления всех положительных видов Voges-Proskauer (VP) семейства Enterobacteriaceae..

Разработка теста

Отделите аликвоту объемом 1 мл в пробирке и выполните разработку следующим образом: поместите 12 капель (0,6 мл) реагента Voges A и 4 капли (0,2 мл) Voges B. Смешайте для аэрации и оставьте стоять за 5 - 10 минут до выступления. Однако, если тест все еще отрицательный, дайте ему постоять и осмотрите пробирку через 30 минут до 1 часа..

Появление розово-красного цвета указывает на положительную реакцию Фогеса-Проскауэра. Если среда остается желтой, реакция отрицательная.

Добавление разработчиков в указанном порядке и количестве важно, чтобы избежать ложных негативов.

использование

Тест Фогеса-Проскауэра полезен для различения штаммов Кишечная палочка которые являются VP отрицательными, из родов Klebsiella, Enterobacter, Serratia, среди других, которые являются VP положительными.

Контроль качества

Контрольные штаммы могут быть использованы для проверки качества приготовленной среды. Кишечная палочка ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium и Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Ожидаемые результаты являются положительными реакциями Фогеса-Проскауэра только для K. pneumoniae и E. cloacae. Остальные дают негативные реакции.

ссылки

  1. Лаборатории Британии. МР-ВП Средний. 2015. Доступно по адресу: www.britanialab.com
  2. МикроКит Лаборатории М-Идент Фогес Проскауэр. 2014. Доступно: http://www.medioscultivo.com
  3. Mac Faddin J. (2003). Биохимические тесты для выявления бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос-Айрес Аргентина.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
  5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. 5-е изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.