Основа, приготовление и использование селенитового бульона



селенитовый бульон Это селективная жидкая культуральная среда. Он был разработан Leifson для обогащения образцов, в которых подозревается присутствие энтеропатогенных бактерий рода Salmonella..

Эта среда соответствует требованиям Американской ассоциации общественного здравоохранения (APHA) и, следовательно, принята для исследования присутствия сальмонелл в пробах стула, мочи, жидких или твердых продуктов, воды и других..

Химический состав, которым он обладает, способствует восстановлению этих микроорганизмов и, в свою очередь, препятствует росту других. Он в основном токсичен для большинства бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae. Тем не менее, он также позволяет восстанавливать штаммы шигеллы и не ингибирует рост Pseudomonas и Proteus..

Он состоит из безводного гидроселенита натрия, безводного фосфата натрия, пептонов и лактозы. Существует также вариант, к которому добавляется цистин, отсюда и название селенито-цистиновый бульон.

В настоящее время использование селенито-цистинового бульона является предпочтительным, поскольку достигается более высокий процент извлечения сальмонелл, эквивалентный тому, который наблюдается с другими селективными средами с той же целью, такими как тетратионатный натриевый бульон..

индекс

  • 1 фундамент
  • 2 Подготовка
    • 2.1 - Селена
    • 2.2 -Подготовка коммерческой среды
    • 2.3 Вариант селенито-цистинового бульона
  • 3 использования
  • 4 отобранных
  • 5 Контроль качества
  • 6 Ограничения
  • 7 ссылок

фундамент

Пептоны, содержащиеся в бульоне, служат питательными веществами для правильного развития микроорганизмов. Штаммы сальмонеллы используют пептоны в качестве источника азота, витаминов и аминокислот.

Лактоза - это ферментируемый углевод, а селенит натрия - это ингибирующее вещество, которое замедляет рост грамположительных бактерий и большинства бактерий, присутствующих в кишечной флоре, особенно семейства Enterobacteriaceae. Фосфат натрия является буфером, который стабилизирует рН среды.

В случае варианта селенитового бульона, содержащего L-цистин, это дополнительное соединение является восстановителем, который минимизирует токсичность селенита, увеличивая восстановление сальмонеллы.

подготовка

-Селенитовый бульон

Если у вас есть компоненты смеси, вы можете взвесить:

4 г безводного натрия гидроселенита.

10 г безводного фосфата натрия.

5 гр пептон.

4 г лактозы.

Растворить соединения в 1 л стерильной дистиллированной воды. Это может быть немного нагрето, чтобы полностью раствориться.

В некоторых лабораториях среду стерилизуют в течение 10 минут для стерилизации, так как автоклав не должен использоваться. Если среда стерилизована, ее можно хранить в холодильнике до использования..

Его также можно приготовить без стерилизации и подавать 10 - 15 мл в стерильные пробирки..

В этом случае его следует оставить в покое и использовать немедленно. Поскольку среда не стерильна, ее нельзя хранить в холодильнике для дальнейшего использования..

-Подготовка коммерческой среды

Если коммерческая среда доступна, 23 г обезвоженной среды взвешивают и растворяют в одном литре стерильной дистиллированной воды. Тепло на короткое время до полного растворения. Не стерилизовать в автоклаве. Подавать в асептических условиях по 10 или 15 мл в стерильных пробирках..

Конечный pH среды должен составлять 7,0 ± 0,2..

Следует отметить, что цвет обезвоженной среды - бежевый, а препарат - прозрачный и полупрозрачный янтарный..

Вариант селенито-цистинового бульона

Он содержит те же соединения селенитового бульона, но добавлено 10 мг цистина. Остальная часть процедуры точно такая же, как описано выше..

приложений

Эта среда является специальной для использования в эпидемиологических исследованиях, когда заболевание не находится в острой стадии, у пациентов без симптомов заболевания или у здоровых носителей.

Выделение рода Salmonella обычно затруднено, поскольку обычно обнаруживается, что они загрязняют образцы скудным образом. Нахождение в небольших количествах легко перекрывается ростом других бактериальных родов, которые встречаются в большем количестве..

С другой стороны, сырье, с которым обрабатываются обработанные пищевые продукты, часто подвергается воздействию тепла, процессов обезвоживания, использования дезинфицирующих средств, радиации и консервантов, среди прочего..

Следовательно, сальмонеллы, присутствующие в сырье, подвергаются плохому обращению при подаче продукта в вышеупомянутые промышленные процессы. Аналогично, в случае клинических образцов, таких как фекалии, штаммы могут быть слабыми, если они получены от пациентов, которых лечили антибиотиками..

Поэтому любой образец, в котором подозревается присутствие сальмонелл, должен быть предварительно обогащен лактозным бульоном, а затем обогащен селенитовым бульоном для оптимизации его восстановления в селективных средах, таких как агар SS, ксилозный агар, дезоксихолат лизина (XLD) ), кишечнорастворимый гектоен-агар (HE) и ярко-зеленый агар, среди прочих.

посаженный

Для образцов стула берут 1 г образца и суспендируют в пробирке с 10-15 мл селенитового бульона. Если стул жидкий, возьмите 1 мл и суспендируйте в бульоне. Для ректальных тампонов слить тампоновый материал в бульон.

В образцах твердой пищи берут 1 г и суспендируют в селенитовом бульоне.

В жидких пищевых продуктах смешать в равных частях с селенитовым бульоном в двойной концентрации.

Для образцов мочи центрифугируйте, отбрасывайте супернатант, берите весь осадок и суспендируйте его в селенитовом бульоне..

Бульоны инкубируют при 37 ° С в течение 24 часов инкубации. Бактериальный рост подтверждается мутностью. Дополнительная пробирка на образец также может быть включена для инкубации при 42 ° С. Впоследствии высевают селективные твердые среды из селенитового бульона.

Контроль качества

Для контроля стерильности селенитовый бульон из каждой партии без инокуляции инкубируют при 37 ° С в течение 24 часов. Ожидается, что не будет помутнения или изменения цвета среды.

Чтобы контролировать хорошее функционирование среды, можно использовать известные штаммы, такие как:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Кишечная палочка ATCC 25922 и Proteus mirabilis ATCC 43071.

Ожидаемые результаты:

  • Для первых трех штаммов бактерий рост должен быть удовлетворительным.
  • в Кишечная палочка частичное торможение.
  • Для протея умеренного роста.

ограничения

Средний селенитовый бульон токсичен для кожи человека, поэтому следует избегать прямого контакта.

ссылки

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение питательных сред селенита натрия и тетратионата натрия, оба инкубируют при 37 ° C и 42 ° C для изоляция сальмонелла табуретки носителей табуретки. Преподобный Биомед 2003; 14 (4): 215-220
  2. Лаборатории Британии. Селенито Кальдо. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
  3. Неоген Лаборатории Селенито бульон Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
  4. Гонсалес -Педраза J, Перейра -Санандрес N, Сото -Валела Z, Эрнандес -Агирре Е, Вильярреал-Камачо Ж. Микробиологическая изоляция Salmonella spp. и молекулярные инструменты для его обнаружения. Здоровье, Барранкилья 2014; 30 (1): 73-94. Доступно с: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.