Peptone Water Foundation, подготовка и использование

пептонад вода это неселективная жидкая среда для обогащения, используемая в основном в качестве разбавителя для образцов пищи или других материалов. Это средство с химической точки зрения очень простое, содержит пептон из мяса, хлорид натрия и воду.

Обладает определенной питательной ценностью, позволяющей обогатить образец. Если есть побитые бактерии, это средство может восстановить жизнеспособность. Это особенно полезно при восстановлении бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae..

В случае восстановления Salmonellas, рекомендуется использовать забуференный водный вариант пептонады; Это служит средством предварительного обогащения образца, в этом случае оно содержит другие элементы, такие как динатрийфосфат и дикалийфосфат.

Обычно пептонадную воду готовят при нейтральном pH, однако существуют другие варианты, где необходимо, чтобы pH составлял 8,5 ± 0,2 (щелочной), поскольку выделяемые бактерии являются алкалофильными, как, например, Vibrio cholerae.

С другой стороны, эту среду можно использовать в качестве базовой среды для испытаний на ферментацию углеводов..

индекс

• 1 фундамент
• 2 Подготовка
  • 2.1 Домашняя подготовка (некоммерческая)
  • 2.2 Приготовление с использованием коммерческой среды
  • 2.3 Подготовка к тестам брожения
  • 2.4 Другие варианты пептонадной воды
• 3 Использование
  • 3.1 Образцы стула
  • 3.2 Образцы пищи
• 4 Контроль качества
• 5 ограничений
• 6 Ссылки

фундамент

Пептоны обеспечивают питательные вещества, необходимые для развития бактерий, особенно азот и аминокислоты с короткой цепью, а хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Кроме того, среда позволяет диспергировать, гомогенизировать и восстанавливать бактериальные клетки, которые были повреждены в результате промышленных процессов..

В качестве разбавителя он идеально подходит для эффективной замены физиологического раствора (SSF) или фосфатного буфера (PBS)..

Бактериальный рост очевиден, наблюдая его мутность.

подготовка

Домашнее приготовление (некоммерческое)

Взвесить 1 г пептона и 8,5 г хлорида натрия, растворить в 1 л дистиллированной воды. РН должен быть доведен до 7,0. Для этого вы можете использовать 1 N хлорид натрия.

Подготовка с использованием коммерческой среды

Взвесьте 15 г обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Гомогенизировать смесь. При необходимости смесь кипятят в течение 1 минуты для полного растворения. Подавать в 100 мл флаконах или 10 мл пробирках по мере необходимости. Автоклав при 121 ° С в течение 15 минут.

Остудить и использовать или хранить в холодильнике. Конечный pH среды составляет 7,2 ± 0,2..

Цвет обезвоженной среды - светло-бежевый, а приготовленный - светло-янтарный..

Подготовка к тестам брожения

К предыдущему препарату - перед стерилизацией - следует добавить углевод до конечной концентрации 1% плюс индикатор Andrade (кислота фуксин) или феноловый красный (0,018 г / л). Колокол Дарема для наблюдения за газообразованием должен быть помещен на трубы.

Другие варианты пептонадной воды

-Пептонная вода забуференная или забуференная

Он содержит казеиновый ферментативный гидролизат, хлорид натрия, дигидрофосфат калия и додекагидрат гидрофосфата натрия. Конечный рН составляет 7,0 ± 0,2.

Для его приготовления взвесить 20 г обезвоженной среды и растворить в 1 л дистиллированной воды. Дайте постоять примерно 5 минут. Нагреть в течение 1 минуты до полного растворения.

Разлить в подходящие бутылки по мере необходимости. Стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут..

-Щелочная пептонированная вода

Взвесьте 25 г обезвоженной среды и растворите в 1 л воды. Действуйте, как описано выше. РН колеблется от 8,3 до 8,7.

использование

Инокулят делается путем помещения образца непосредственно.

Он используется для разбавления образцов, особенно когда есть подозрение, что могут быть повреждены бактерии. Обычно разведения 1:10 и 1: 100.

Инкубировать в течение 24 часов при аэробиозе при 35-37 ° С.

Образцы стула

Для образцов кала, ищущих сальмонеллы, рекомендуется использовать забуференную или забуференную воду в качестве среды для предварительного обогащения..

Для этого выполните следующие действия:

Если стул сформировался, возьмите 1 г образца. Если они жидкие, возьмите 1 мл стула и суспендируйте в пробирке с 10 мл забуференной пептонированной воды. В случае ректальных тампонов, вылить материал, содержащийся в тампоне, в пробирку с забуференной пептонированной водой.

Во всех случаях очень хорошо перемешайте и гомогенизируйте образец..

Инкубировать при 37 ° С в течение 18-24 часов. Затем субкультивируют в обогащенном бульоне, таком как селенитный цистиновый бульон или тетратионатный бульон, при 37 ° С в течение 18-24 часов. Наконец культивировать в селективных средах для сальмонеллы, таких как агар SS, агар XLD, агар Hektoen, среди других.

Образцы пищи

Пептонная вода используется в качестве среды для обогащения или в качестве простого разбавителя, но если разыскиваются виды сальмонелл, она используется в качестве среды для предварительного обогащения, как уже описано..

В еде действуйте следующим образом:

Для твердой пищи взвесьте 25 г образца, а для жидкой - 25 мл. Поместите указанную часть в колбы, содержащие 225 мл пептонированной воды. Смешайте и гомогенизируйте образец.

Если есть подозрение, что микробная нагрузка является высокой последовательной разведением или могут быть сделаны десятичные дроби для облегчения подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ).

Количество разведений будет зависеть от типа пробы и аналитического опыта.

Если, наоборот, подозревается, что микробная нагрузка очень мала, нет необходимости делать разведения. Впоследствии, субкультивировать в селективных средах.

В случае еды из моря, таких как морепродукты, рыба, среди прочего, в поисках Vibrio cholerae или другие виды Vibrio, следует использовать пептонную воду, доведенную до pH 8,5 (щелочная пептонированная вода).

Контроль качества

Из каждой подготовленной партии одну-две пробирки следует инкубировать без инокуляции в течение 24 часов при аэробиозе при 37 ° С. В конце времени не должно наблюдаться помутнения или изменения цвета.

Также известные контрольные штаммы могут быть использованы для оценки их эффективности:

Для этого могут быть использованы следующие бактериальные штаммы: Кишечная палочка ATCC 25922, Кишечная палочка ATCC 8927, Золотистый стафилококк ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Во всех случаях ожидается удовлетворительное развитие микробов, которое наблюдается по мутности среды..

ограничения

-Обезвоженная среда очень гигроскопична, поэтому ее следует хранить вдали от влаги..

-Среда не должна использоваться, если наблюдается некоторый тип ухудшения.

-Обезвоженную культуральную среду следует хранить при температуре от 10 до 35 ° C.

-Подготовленная среда должна храниться в холодильнике (2-8 ° C).

ссылки

1. Камачо А., Джайлс М., Ортегон А., Палао М., Серрано Б. и Веласкес О. Методы микробиологического анализа пищевых продуктов. 2009, 2-е изд. Химический факультет, УНАМ. Мексика. Версия для администратора учебных пособий и документов (AMyD) химического факультета, UNAM 1. Доступно по адресу: http://depa.fquim.unam.mx
2. Лаборатории Британии. Буферизованная пептонада воды. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
3. Неоген Лаборатории Пептонная вода. Доступно по адресу: foodsafety.neogen.com
4. Лаборатории Британии. Пептонная вода. 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
5. Мерк Лаборатории Буферная пептонная вода. Доступно по адресу: merckmillipore.com
6. Лаборатории Конда Пронадиса. Щелочная пептонированная вода. Доступно по адресу: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.