Подготовка питательных сред, из чего они состоят, цели и шаги



подготовка питательных сред Это обычная методология, используемая в лабораториях для роста желаемых микроорганизмов. Питательные среды представляют собой твердые, жидкие или полутвердые препараты, которые обладают всеми питательными веществами, необходимыми для развития микробной популяции..

В общем, средства для выращивания микроорганизмов богаты белками и аминокислотами и обычно содержат некоторые компоненты, способствующие росту организма, которые вы хотите изучать, такие как витамины, кровь, сыворотка и другие..

Не существует общей или универсальной культуральной среды, поскольку ее состав варьируется в зависимости от потребностей микроорганизма, представляющего интерес. Некоторые бактерии могут развиваться в любой культуральной среде, но у других есть особые требования.

индекс

  • 1 Из чего он состоит??
    • 1,1 агар
    • 1.2 Жидкости
    • 1.3 Выдержки
    • 1.4 Пептоны
    • 1.5 Амортизаторы
  • 2 цели
  • 3 Типы СМИ
    • 3.1 На основании его состава
    • 3.2 На основании типа микроорганизма
  • 4 шага
  • 5 ссылок

Из чего он состоит??

Микроорганизмы, такие как грибы и бактерии, не могут быть изучены индивидуально из-за их крошечного размера. Таким образом, они должны быть выращены в искусственных средствах, которые позволяют значительный прирост населения.

Например, если мы хотим изучать бактерии, мы должны предоставить им подходящие условия, чтобы они могли размножаться и образовывать колонию (что можно наблюдать невооруженным глазом).

Подготовка питательных сред варьируется в широких пределах в зависимости от типа микроорганизма, который вы хотите культивировать. Прежде чем готовить его, необходимо знать основные пищевые потребности организма в работе.

Далее будут описаны наиболее распространенные компоненты, используемые в питательных средах, чтобы иметь общее представление об их приготовлении:

агар

Он используется в сельскохозяйственных культурах в качестве гелеобразующего агента и добавляется при поиске твердой или полутвердой среды. Первым отвердителем, использованным при приготовлении сред, был желатин, но в 1883 году агар был введен в мир бактериологии У. Гессе..

Бактериологический агар имеет в качестве основного компонента полисахарид сложных ветвей, выделенный из водорослей. Это соединение используется в качестве загустителя для обычных продуктов, таких как мороженое и джемы..

Это очень ценный элемент в микробиологии по нескольким причинам. Главным образом потому, что микроорганизмы не могут его разлагать, разжижается при температуре 100 ° С и остается в жидком состоянии до достижения 45 ° С или менее.

Если вы хотите приготовить твердую среду, концентрация агара должна составлять около 1,5%, а полутвердых - от 0,3 до 0,5%..

жидкости

Выращивание патогенных организмов требует телесных жидкостей, чтобы они могли развиваться так же, как в естественной среде. По этой причине добавляется цельная или дефибриллированная кровь. Жидкость извлекается из здорового животного и после стерилизации добавляется в культуральную среду.

выдержки

Их получают из разных частей животных (например, мяса или печени) или овощей (семян) и обрабатывают для получения твердого концентрата в виде пасты или порошка. Наиболее распространенными являются дрожжи, солод и мясо.

Peptonas

Эти органические соединения получают путем ферментативного или химического гидролиза тканей животных или растений. Цель состоит в том, чтобы добавить содержание, богатое аминокислотами, которые являются основными единицами белков.

Амортизаторы

Буферы или буферные системы предотвращают внезапные изменения pH и помогают поддерживать оптимальный диапазон, который переносит организм.

Большинство организмов могут нормально развиваться при pH 7, хотя некоторые бактерии предпочитают щелочную среду. Тем не менее, есть бактерии, которые сопротивляются изменениям рН между значениями от 6 до 9.

У видов, чувствительных к pH, повреждение вызвано не чрезмерным количеством ионов водорода или гидроксила, а увеличением слабых кислот или оснований, которые могут проникать в клетку.

Также добавлены индикаторы того, что pH контролирует его и позволяет избежать отклонений, вызванных ферментацией или другими процессами..

цели

Основная цель при приготовлении питательной среды - добавить все необходимые компоненты, чтобы обеспечить успешное развитие организма, который хочет быть изолированным. Для достижения желаемой среды необходимо определить наиболее эффективную комбинацию компонентов и питательных веществ..

Как подготовка, так и хранение среды имеют решающее значение для обеспечения успешного роста, поскольку эти этапы зависят от состава окружающей среды и наличия питательных веществ..

Следует учитывать, что культивирование микроорганизмов является задачей, на которую влияют несколько факторов, внешних по отношению к культуральной среде, таких как интенсивность получаемого света, температура и уровень кислотности или щелочности среды. Поэтому каждая из этих переменных должна быть принята во внимание.

Типы медиа

На основании его состава

По своему составу можно выделить три основных типа сельскохозяйственных культур: натуральные или эмпирические, полусинтетические и определенные синтетические или химические средства..

Природная среда

В естественной среде точный состав неизвестен. К ним относятся такие ингредиенты, как молоко, разбавленная кровь, овощные соки, экстракты и настои мяса и пептонов. По экономическим причинам часто добавляются недорогие компоненты, такие как соевый экстракт, сыворотка, патока и т. Д..

Полусинтетические носители

Она называется полусинтетической средой, если состав ее частично известен. Любая среда, содержащая агар, становится полусинтетической средой.

Среди них - папар-декстрозный агар, чапек-докс-агар, овсяный агар, пептон с мясным агаром и другие примеры..

Синтетическая или химически определенная среда

В этом случае состав среды - с точки зрения количества углерода, азота, серы, фосфора и любых других источников факторов роста - полностью известен. Это очень полезно, если вы хотите получить воспроизводимые результаты для других исследователей.

Для так называемых «микроорганизмов с особыми требованиями роста» необходимо добавлять необходимые компоненты. Примером этого типа являются лактобацилла.

На основании типа микроорганизма

Аналогичным образом, существует другая классификация питательных сред, основанная на типе микроорганизма, который может расти в нем. Следуя этому принципу, мы имеем следующие общие средства обогащения, селективные и дифференциальные. Каждый из них описан ниже:

Общие средства

Они допускают развитие широкого спектра микроорганизмов. Если какой-либо организм нуждается в особых условиях для своего роста, он не сможет успешно развиваться в этом типе культур..

Средства обогащения

Средства обогащения способствуют росту определенного типа микроорганизмов, но никакое вещество не было добавлено, чтобы предотвратить рост других видов микробов в нем..

Селективный медиа

Они ищут специфический рост микроорганизма, называют его грибами, бактериями, простейшими, среди других. Для этого они тормозят развитие других.

Для достижения этой цели могут быть добавлены смертельные химические соединения для большой группы микроорганизмов и безвредны для интересующего организма или добавлены источники энергии, которые могут быть ассимилированы только искомым микробом.

Селективные среды используются при отборе медицинских образцов для выращивания патогенного микроорганизма. Здесь необходимо способствовать росту возбудителя и препятствовать развитию нормальной микрофлоры у пациента..

Например, висмутсульфитный агар не позволяет размножаться грамположительным бактериям и большому количеству бактерий, обнаруженных в желудочно-кишечной полости. Поэтому он используется для выращивания грамотрицательных бактерий, вызывающих брюшной тиф, Salmonella typhi в фекальных образцах.

Дифференциальные медиа

Этот тип использует некоторые диагностические признаки интересующего организма (например, особенности его метаболизма), чтобы иметь возможность идентифицировать их по отношению к другому виду, который растет в той же среде.

И дифференциальные среды, и селективные среды очень полезны в области клинической микробиологии и общественного здравоохранения, поскольку в этих дисциплинах необходимо обнаруживать присутствие специфических микроорганизмов, связанных с плохими гигиеническими условиями или условиями..

Индикаторные вещества могут быть добавлены к урожаю, которые дают отличительную характеристику желаемой колонии. Например, агар-эозин-метиленовый синий (сокращенно EMB) и агар МакКонки добавляются с лактозой и индикатором pH.

Таким образом, когда в этих средах развивается колония со способностью ферментировать лактозу и продуцировать альдегиды, их можно наблюдать в особом цвете..

меры

В настоящее время питательные среды можно приобрести в лиофилизированной форме. Таким образом, подготовка облегчается, и только продукт регидратируется. Содержимое должно быть взвешено (с учетом конечного количества, которое вы хотите приготовить) и растворено в дистиллированной воде, следуя всем указаниям продукта..

Содержимое жидкой среды необходимо разделить на нужные емкости (чашки Петри, пробирки и т. Д.) Для последующей стерилизации. Чтобы распределить твердую среду, необходимо расплавить ее, используя микроволновую печь или подвергая материал водяной бане. PH среды должен быть отрегулирован.

Обычно агар используется в пробирках или в чашках Петри. Если агар затвердевает в наклонном положении, с соответствующим углом, так что конечная оконечная кромка является диагональной, это расположение называется пиком флейты или наклонными трубками. Когда агар затвердевает в полностью вертикальном положении, он называется «глубоким».

После стерилизации носителя - с помощью автоклава - им дают остыть. Они должны обрабатываться в среде, свободной от микроорганизмов, наиболее распространенной является работа с зажженной зажигалкой, которая обеспечивает асептическую среду в непосредственной близости..

ссылки

  1. Селис, Дж. Э. (2006). Клеточная биология: лабораторный справочник (Том 2). Elsevier.
  2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Бейли Скотт: микробиологическая диагностика. Панамериканская медицинская.
  3. Оливас Э. (2004). Руководство по практике микробиологии I и II и паразитологии. Автономный университет Сьюдад-Хуарес.
  4. Schlegel, H.G. & Zaborosch, C. (1993). Общая микробиология. Издательство Кембриджского университета.
  5. Tortora, G.J., Funke, B.R. & Case, C.L. (2007). Введение в микробиологию. Ed. Panamericana Medical.