Основа, подготовка и использование Half SIM



половина сим Это полутвердый и дифференцированный агар, специально разработанный для идентификации некоторых бактерий, в основном семейства Enterobacteriaceae. Он состоит из триптина, пептона, сульфата железа, сульфата аммония, тиосульфата натрия и агара.

Эта среда позволяет выполнить три важных испытания: производство сероводорода (H2S) образование индола и подвижность, отсюда и аббревиатура SIM. Из-за его большой полезности это не может быть недостатком в лаборатории бактериологии.

В отличие от других сред, он должен быть полутвердым, чтобы можно было определить способность некоторых бактерий двигаться. В этом смысле этот тест очень хорошо работает для Enterobacteriaceae, но не для грамотрицательных неферментирующих бацилл, где предпочтительнее использовать другие методы, такие как, например, ожидающая капля.

Среда SIM позволяет различать определенные специфические свойства, которые характеризуют одни бактерии по отношению к другим. Например Кишечная палочка это отличается тем, что H2S (-), индол (+) и подвижность (+), а Proteus mirabilis это Н2S (+), индол (-), подвижность (+).

индекс

  • 1 фундамент
    • 1.1 Источник питания
    • 1.2 Производство сероводорода
    • 1.3 Образование индола
    • 1.4 Подвижность
  • 2 Подготовка
    • 2.1 Половина SIM
    • 2.2 Реагент Ковача
    • 2.3 Реагент Эрлиха
  • 3 использования
    • 3.1 Сеялка
  • 4 Контроль качества
  • 5 ограничений
  • 6 Ссылки

фундамент

Это культуральная среда, которая считается дифференцированной, поскольку ее использование позволяет отличить микроорганизмы, способные продуцировать сероводород, от тех, которые этого не делают; также выделяет те, которые образуют индол, из триптофана из тех, которые его не образуют, и, наконец, отличает подвижность от неподвижных бактерий..

Источник питания

Как и любая культуральная среда, она содержит элементы, которые обеспечивают необходимые питательные вещества для развития нетребовательных микроорганизмов. Эти элементы представлены пептонами и триптеинами.

Развитие микроорганизма в окружающей среде необходимо для того, чтобы можно было наблюдать наличие или отсутствие характеристик, оцениваемых этой средой..

Производство сероводорода

Буква S акронима SIM относится к производству сероводорода (H2S). Бактерии, способные образовывать сероводород, будут забирать серу тиосульфата натрия.

Как только Н сформирован2S - бесцветные газы - это реагирует с солью железа, присутствующей в среде, с образованием сульфида железа, отчетливо видимого (черный осадок). Бактерии, которые не образуют H2S, оставьте середину исходного цвета (бежевый).

Наличие черного осадка может затруднить интерпретацию моторики. Однако известно, что большинство Н-продуцирующих энтеробактерий2S имеют положительную подвижность, такую ​​как сальмонелла, протеус и цитробактер. Кроме того, черный осадок, который охватывает практически всю среду, свидетельствует о положительной подвижности.

Тренировка индола

Вторая буква аббревиатуры SIM - это «Я», которое обозначает образование индола.

В этом смысле триптеина, помимо того, что является источником питательных веществ, выполняет еще одну фундаментальную функцию. Этот пептон богат аминокислотой триптофан, поэтому он может показать бактерии, которые производят триптофаназу.

Этот фермент ответственен за отсечение аминокислоты триптофан с последующим образованием индола (бесцветного вещества), пировиноградной кислоты и аммония..

Вот почему, чтобы продемонстрировать эту реакцию, необходимо добавить выделяющее вещество (реагент Эрлиха или реагент Ковача). Любой из них вступает в реакцию с индолом, образуя на поверхности агара кольцеобразное вещество красного цвета фуксии. Если появляется кольцо фуксии, тест индола интерпретируется как положительный.

Бактерии, которые не имеют этого фермента, не образуют кольцо и интерпретируются как отрицательный индольный тест.

Важно отметить, что индольный тест должен интерпретироваться последним, так как после добавления реагента среда становится мутной, что затрудняет визуализацию подвижности..

подвижность

Наконец буква «М» слова SIM означает подвижность. Чтобы иметь возможность оценить подвижность, эта среда является стратегически полутвердой, поскольку эта характеристика необходима для того, чтобы можно было наблюдать, есть ли бактериальное движение или нет. Бактерии, которые имеют жгутики, являются теми, которые дают этот положительный тест.

Положительный тест будет очевиден, когда наблюдается мутность как в исходном инокуляте, так и вокруг него. В то время как немобильные бактерии развиваются только в начальном пути инокулята.

подготовка

Половина SIM

Взвесьте 30 г обезвоженной среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Смесь оставляют стоять в течение 5 минут и затем нагревают до кипения, часто перемешивая до полного растворения..

Распределить смесь в пробирках с хлопковой крышкой и автоклавировать при 121 ° С в течение 15 минут. Снимите штатив для пробирок из автоклава и дайте ему затвердеть в вертикальном положении, чтобы носитель имел форму блока..

Для хранения его хранят в холодильнике до использования. Готовая среда должна иметь конечный рН 7,3 ± 0,2.

В момент инокуляции среды она должна быть комнатной температуры. Цвет среды бежевый.

Реагент Ковача

Отмерить 150 мл амила или изоамила или бутилового спирта. (Используйте один из трех упомянутых).

Растворить 10 г п-диметиламинобензальдегида. Затем медленно добавьте 50 мл концентрированной соляной кислоты.

Готовый к применению реагент бесцветный или светло-желтый. Его следует хранить в янтарной бутылке и хранить в холодильнике. Не используйте, если он принимает темно-коричневый цвет; это указывает на то, что он поврежден. Этот реагент предпочтителен при работе с энтеробактериями.

Реактив Эрлиха

Взвесить 2 г п-диметиламинобензальдегида и растворить в 190 мл абсолютного этилового спирта и медленно смешать с 40 мл концентрированной соляной кислоты. Храните реагент Ковача таким же образом. Реагент Эрлиха используется больше для неферментирующих и анаэробных бактерий.

приложений

Среда SIM широко используется в бактериологических лабораториях. Преимущество состоит в том, что в одной и той же пробирке при идентификации энтеробактерий можно наблюдать три существенные характеристики.

посаженный

Правильный способ посева этой среды - использование иглы, с помощью которой часть чистой колонии, которую нужно исследовать, отбирают и вставляют в центр среды по вертикали. Один удар должен быть сделан. Пункция не должна достигать дна трубки, правильная вещь - покрывать только две трети глубины.

Не рекомендуется повторять инокулят, так как это может привести к ложным интерпретациям положительной подвижности. Инокулированную среду инкубируют при аэробиозе при 37 ° С в течение 24 часов..

Определено время, в течение которого наблюдалось, было ли производство Н или нет2S и моторика читается. Наконец, индол раскрывается, добавляя 3-4 капли реагента Эрлиха или Ковача, его осторожно перемешивают и интерпретируют.

Контроль качества

В качестве контроля стерильности одну или две пробирки инкубируют без инокуляции в печи при 37 ° С в течение 24 часов. Ожидается, что после этого времени не будет никакого роста или изменения цвета.

В качестве контроля качества могут использоваться сертифицированные известные штаммы, такие как: Кишечная палочка ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Шигелла Сонней ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Ожидаемые результаты: Кишечная палочка H2S отрицательная, индольная и положительная подвижность, Enterobacter aerogenes только положительная моторика, Salmonella typhimurium H2S и положительная подвижность, с отрицательным индолом. Proteus vulgaris все позитивно, пока Klebsiella pneumoniae и Шигелла Сонней все отрицательно.

ограничения

-Некоторые штаммы Морганелла Моргания, среди других штаммов может продуцировать коричневатый пигмент в этой среде из-за производства меланина, это не следует путать с осадком сульфида железа. У неопытных специалистов такая ситуация может генерировать ложные срабатывания при интерпретации H-теста2S.

-Строгие аэробные бактерии будут расти только на поверхности трубки, что затрудняет интерпретацию подвижности.

ссылки

  1. BD Laboratories BBL SIM Средний. 2008. Доступно по адресу: bd.com
  2. Неоген Лаборатории SIM Medium. Доступный в: продовольственная безопасность
  3. Дифко Франциско Сория Мельгуизо. SIM Medium. 2009. Доступно по адресу: http://f-soria.es
  4. Бризуэла-Лаборатория Лаборатория SIM Medium. Доступно по адресу: .brizuela-lab.com
  5. Лаборатории Британии. SIM Medium. 2015. Доступно по адресу: studyres.es/doc.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. 5-е изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.