MIO Medium Foundation, подготовка и использование

половина МИО является биохимическим тестом, который используется для определения видов бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae. Он довольно питательный и состоит из глюкозы, дрожжевого экстракта, пептона, триптина, L-орнитина гидрохлорида, бромкрезола пурпурного и агара..

Значение его аббревиатуры (MIO) описывает каждый из параметров, которые можно наблюдать в этой среде; подвижность, индол и орнитин. Подвижность - это способность микроорганизма двигаться при наличии жгутиков. Для того чтобы это свойство наблюдалось, консистенция среды должна быть полутвердой, чтобы в препарате было меньше агара..

Индол производство свидетельствует наличие триптофаназы фермента, действующий на аминокислоты триптофана, что требует использования развивающегося реагента к видимому индолу.

Наконец, орнитин определяет, способна ли бактерия декарбоксилировать аминокислоту, то есть содержит ли она фермент декарбоксилазу оринитина..

индекс

• 1 фундамент
  • 1.1 Пептон, дрожжевой экстракт и триптейн
  • 1.2 Подвижность
  • 1,3 Глюкоза
  • 1,4 L-орнитин
  • 1.5 индикатор pH
• 2 Техника высева и развития
• 3 Подготовка
  • 3.1 MIO Medium
  • 3.2 Реагент Ковача (разработчик индолового теста)
• 4 Использование
• 5 Контроль качества
• 6 Ссылки

фундамент

Пептон, дрожжевой экстракт и триптейн

Эти элементы способствуют питательной силе этой среды. Они служат источником питательных веществ и незаменимых аминокислот для развития бактерий..

Кроме того, Триптиказно является источником триптофана, чтобы показать присутствие триптофаназы фермента, который ухудшает триптофан индола восстановительного дезаминирования, рилизинг-пировиноградную кислоту, аммиак и энергию.

Индол бесцветен, поэтому его присутствие обнаружено, добавив пять капель реагента Эрлиха или Ковача, как с р-диметиламинобензальдегидом.

Альдегидная группа этого соединения реагирует с индолом, образуя фуксиево-красный продукт в форме кольца на поверхности агара.

Любой след цвета должен рассматриваться как положительное доказательство. Тест должен быть прочитан немедленно, потому что через некоторое время цвет ухудшается.

С другой стороны, этот тест следует выявить после регистрации результатов подвижности и декарбоксилирования орнитина..

интерпретация

Положительный тест: формирование фуксии красного кольца при добавлении капель реагента Ковача.

Отрицательный тест: нет образования колец.

подвижность

Способность бактерий к перемещению будет подтверждена, если наблюдается мутная среда или имеется толстая линия роста, которая расширяется вокруг первоначальной инокуляции..

Отрицательный тест на подвижность будет подтвержден наблюдением за тонкой линией роста, и все вокруг будет без роста.

Важно, чтобы подвижность считывалась до выявления индола, поскольку добавление реагента затуманивает всю среду.

У мобильных, но медленно растущих бактерий трудно продемонстрировать их подвижность с помощью этой среды. В этом случае рекомендуется использовать другие тесты или методы, такие как подвижная среда или метод каплепадения..

глюкоза

Глюкоза - это ферментируемый углевод, который помимо энергии подкисляет среду, что является необходимым условием для декарбоксилирования аминокислоты орнитина..

Ферментация глюкозы должна всегда происходить, исходя из того принципа, что все бактерии, принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae, ферментируют глюкозу.

L-орнитин

Если бактерия продуцирует фермент декарбоксилазу орнитина, она может действовать после подкисления среды в результате ферментации глюкозы..

Фермент орнитиндекарбоксилаза действует на карбоксильную группу аминокислоты, образуя амин, называемый путрезин, который снова подщелачивает среду..

Этот тест следует читать после 24 часов инкубации, потому что, если вы попытаетесь прочитать, прежде чем вы сможете неправильно интерпретировать тест с ложным отрицанием.

Следует помнить, что первой реакцией, которая происходит, является ферментация глюкозы, так что среда желтеет в начальной фазе (первые 10-12 часов). Если впоследствии происходит декарбоксилирование орнитина, среда станет пурпурной.

Важно, чтобы интерпретировать тест декарбоксилирование орнитина до выявления индола, так как добавление реагента Ковача изменяет цвет среды.

интерпретация

Отрицательный тест: средний желтый или с желтым фоном.

Положительный тест: полностью фиолетовый.

Индикатор PH

В этом случае используется бромкрезоловый фиолетовый; человек, отвечающий за выявление, когда есть изменение pH в середине. При подкислении индикатор становится желтым, а при подщелачивании - фиолетовым.

Техника семян и развития

Для посадки среды MIO используют прямую петлю или иглу и собирают часть исследуемой колонии..

Глубокий прокол производится в среде MIO по прямой линии. Не рекомендуется выполнять двойной прокол, так как это может дать ложное изображение подвижности, если проколы не выполняются в одном и том же месте..

Инкубируйте от 24 до 48 часов при 37 ° C при аэробиозе. Соблюдайте результаты в следующем порядке: подвижность, декарбоксилирование орнитина и, наконец, выявление индола.

Желательно в асептических условиях взять 2 мл среды, перенести ее в стерильную пробирку и провести там тест на индол, чтобы в случае отрицательного результата оставшуюся часть оригинальной пробирки можно было инкубировать в течение 24 часов, чтобы снова обнаружить индол..

Выработка индола осуществляется следующим образом: от 3 до 5 капель реагента Ковача добавляют в среду МИО и энергично перемешивают. Наблюдается, если появляется красное кольцо фуксии или нет.

подготовка

Половина МИО

Взвесьте 31 г среды MIO и растворите в одном литре дистиллированной воды..

Нагревайте, пока смесь не закипит в течение одной минуты, часто помешивая, пока агар полностью не растворится. Распределить 4 мл среды в 13/100 пробирках с хлопковой крышкой.

Стерилизовать в автоклаве при 121 ° С в течение 15 минут. Извлеките из автоклава и дайте ему стоять прямо в стойке таким образом, чтобы образовался полутвердый блок.

Хранить в холодильнике 2-8 ° С. Разрешить закалить перед посадкой бактериального штамма.

Цвет обезвоженной среды - бежевый, а цвет среды - слегка пурпурный, опалесцирующий.

Конечный pH приготовленной среды составляет 6,5 ± 0,2.

Среда становится желтой с кислотным pH и фиолетовым при щелочном pH.

Реагент Ковача (разработчик индолового теста)

Этот реагент готовят следующим образом:

Отмеряют 150 мл амила, изоамила или бутилового спирта (любого из трех). В нем растворено 10 г п-диметиламинобензальдегида. Затем медленно добавляют 50 мл концентрированной соляной кислоты..

Приготовленный реагент бесцветный или светло-желтый. Его следует хранить в янтарной бутылке и хранить в холодильнике. Темно-коричневый цвет показывает его ухудшение.

Также реагент Ковача может быть заменен реагентом Эрлиха. Последний, будучи более чувствительным, является предпочтительным, чтобы выявить индол бактерий, которые производят его в небольших количествах, так как в некоторых не-ферментативный грамотрицательных бацилл и некоторых анаэробов.

использование

Эта среда является тестом, дополняющим ряд биохимических тестов для идентификации бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae..

Данные по де-карбоксилированию орнитина служат для дифференциации Шигелла Сонней, что дает положительный, из Shigella boydii, Shigella flexneri и S. dysenterieae, которые дают негативы.

Он также дифференцирует род Klebsiella, который дает отрицательный, род Enterobacter, где большинство его видов являются положительными.

Контроль качества

Каждый раз, когда готовится партия среды MIO, может быть проведен контрольный тест. Для этого используются известные или сертифицированные штаммы для наблюдения за поведением среды..

Штаммы, которые могут быть использованы Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes и Proteus mirabilis.

Ожидаемые результаты Кишечная палочка и моргания. Дан М: +, Я: + и О: +.

Klebsiella pneumoniae дает все отрицательное (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis и Enterobacter aerogenes Дэн М: + Я: - и О: +.

ссылки

1. Mac Faddin J. (2003). Биохимические тесты для выявления бактерий, имеющих клиническое значение. 3-е изд. Редакция Panamericana. Буэнос-Айрес Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Микробиологическая диагностика Бэйли и Скотта. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. 5-е изд. Редакция Panamericana S.A. Аргентина.
4. Лаборатории Британии. MIO Medio 2015. Доступно по адресу: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Moility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Доступно по адресу: bd.com
6. Valtek Laboratories Средний М.И.О. Подвижность, Индол, Орнитин. 2010. Доступно по адресу: andinamedica.com